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更新時(shí)間：2025.05.31
高速逆流雙水相色譜法純化卵白蛋白

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生物大分子的液_固色譜純化過程中固相載體會產(chǎn)生產(chǎn)物吸附、變性等不良影響。高速逆流色譜無需固相載體 ,且具有高分便率和高回收率的優(yōu)點(diǎn) ,其中有機(jī)相 水相體系在分離天然產(chǎn)物中應(yīng)用廣泛 ,而應(yīng)用雙水相體系分離生物大分子尚處于研究階段。雙水相高速逆流色譜體系的建立與儀器設(shè)備及操作工藝條件密切相關(guān) ,因此利用多分離柱高速逆流色譜儀 ,研究了PEG10 0 0_無機(jī)鹽雙水相體系對標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)混合物以及卵白蛋白的分離。pH值和PEG濃度對不同種類蛋白質(zhì)的分配系數(shù)影響不同 ,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在pH9 2的 15 0 % (W W)PEG10 0 0 17 0 % (W W)磷酸鉀鹽體系中 ,細(xì)胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白的分配系數(shù)差異較大 ,且分布合理 ,因而采用該體系在 0 8mL min流速 ,85 0r min轉(zhuǎn)速的條件下 ,成功分離了細(xì)胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白的混合物。實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)在pH9 2的 16 0 % (W W)PEG10 0 0 17 0 % (W W)磷酸鉀鹽體系中 ,雞蛋清樣品中的主要蛋白質(zhì)成分 :卵轉(zhuǎn)鐵蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系數(shù)差異最大 ,因而采用該體系在 1 8mL min流速、85 0r min轉(zhuǎn)速的條件下 ,2 0 0min內(nèi)從雞蛋清樣品中成功分離卵白蛋白 ,其電泳純度為 10 0 % ,收率為 95 %。

外泌體聯(lián)合絲素蛋白支架對軟骨缺損的修復(fù)作用

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目的探討多聚蛋白多糖(Aggrecan)過表達(dá)載體修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)來源外泌體聯(lián)合絲素蛋白支架對新西蘭大白兔軟骨缺損的修復(fù)作用。方法培養(yǎng)兔源性BMSCs,流式細(xì)胞儀檢測第2代BMSCs表面蛋白CD44、CD29、CD34和CD45表達(dá)。慢病毒Aggrecan過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs,超速離心法提取外泌體,Western Blot方法檢測外泌體分子標(biāo)志物CD81和CD63的表達(dá)。構(gòu)建絲素蛋白支架聯(lián)合外泌體復(fù)合物,利用掃描電鏡技術(shù)檢測絲蛋白支架的結(jié)構(gòu)。利用蘇木精-伊紅(HE)染色和番紅-快綠染色檢測新西蘭大白兔軟骨缺損模型中軟骨結(jié)構(gòu)。結(jié)果第2代BMSCs表面蛋白CD44和CD29表達(dá)分別為60.2%和58.3%,CD34和CD45表達(dá)分別為3.4%和2.6%。慢病毒Aggrecan過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染效率為(95±2)%。掃描電鏡觀察顯示,外泌體為直徑40～100nm雙層膜的膜狀結(jié)構(gòu)。Western Blot檢測顯示,外泌體可以表達(dá)分子標(biāo)志物CD81和CD63。HE染色和番紅-快綠染色結(jié)果顯示,Aggrecan過表達(dá)載體修飾BMSCs分泌的外泌體聯(lián)合絲素蛋白支架對軟骨缺損的修復(fù)作用明顯優(yōu)于BMSC組和陰性對照組(F=19.298、12.548,P<0.05)。結(jié)論 Aggrecan過表達(dá)載體修飾BMSCs分泌的外泌體聯(lián)合絲素蛋白支架對軟骨缺損的修復(fù)具有明顯的促進(jìn)作用,可為骨性關(guān)節(jié)炎治療提供新的思路與方法。

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