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目的建立聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)產(chǎn)物直接酶標(biāo)記微孔板反向分子雜交法用于人乳頭瘤病毒(HPV)型別鑒定。方法利用HPV通用引物介導(dǎo)PCR(GPPCR)擴(kuò)增靶DNA,然后對(duì)產(chǎn)物直接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物(HRPPEIQI),與預(yù)先包被在微孔板上的HPV寡核苷酸探針雜交后酶顯色法檢測(cè)。結(jié)果HPV各型之間無(wú)交叉雜交;雜交靈敏度可達(dá)13~76個(gè)病毒DNA拷貝,比PCR瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)高10倍;該法重復(fù)性好,陽(yáng)性孔批內(nèi)CV為6.34%,批間CV為10.53%,陰性孔批內(nèi)CV為1%,批間CV為5.79%;而且雜交影響因素較少。結(jié)論該法特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便,無(wú)放射性和EB染料污染,雜交時(shí)間短、儀器讀取結(jié)果,便于大量常規(guī)臨床樣本定性或定量檢測(cè)。
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