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采用PCR-DGGE等分子生物學(xué)技術(shù),從平行AN/AO工藝六個(gè)反應(yīng)池的活性污泥樣品中提取總DNA,采用套式PCR(nested PCR)進(jìn)行兩輪PCR擴(kuò)增,對(duì)α-Proteobacteria、β-Proteobacteria的16S rDNA片段進(jìn)行DGGE(變性梯度凝膠電泳)分離,從而分析活性污泥樣品中該類(lèi)除磷菌的種群結(jié)構(gòu)。結(jié)合測(cè)序技術(shù)并通過(guò)NCBI(美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心)基因庫(kù)比對(duì),證實(shí)生物除磷過(guò)程中存在著豐富的α-Proteobacteria、β-Proteobacteria,同時(shí)可以得到其中優(yōu)勢(shì)類(lèi)群的初步認(rèn)識(shí)。結(jié)果表明,PCR-DGGE結(jié)合測(cè)序技術(shù)可以用于污水處理過(guò)程中樣品的除磷菌群落結(jié)構(gòu)分析。
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目的探討唾液中分泌片SC對(duì)敏感菌黏附口腔上皮細(xì)胞能力的影響及機(jī)制。方法將敏感菌S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176與來(lái)源于60例健康志愿者的口腔上皮細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng),采用革蘭陽(yáng)性染色分別觀察加入及未加入唾液中SC時(shí)敏感菌的黏附能力,采用熒光定量RT-PCR法分別測(cè)定加入及未加入唾液中SC時(shí)上述3種敏感菌中ALS2與ALS3 mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果在不含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮細(xì)胞體系中,S. sanguis ATCC 10556黏附率最高,三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05);在含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮細(xì)胞體系中,S. sanguis ATCC 10556黏附率最低,三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05);且含SC體系中,3種敏感菌的黏附率均明顯低于不含SC體系中3種敏感菌的黏附率(P均<0. 05)。RTPCR檢測(cè)結(jié)果顯示,在不含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮細(xì)胞體系中,不含SC唾液上清液+S. sanguis ATCC 10556+口腔上皮細(xì)胞體系中ALS2及ALS3 mRNA表達(dá)水平最高,三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05);在含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮細(xì)胞體系中,含SC唾液上清液+S. sanguis ATCC 10556+口腔上皮細(xì)胞體系中ALS2及ALS3 mRNA表達(dá)水平最低,三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05);且含SC體系中3種敏感菌的ALS2與ALS3 mRNA表達(dá)水平均明顯低于不含SC體系中3種敏感菌的表達(dá)水平(P均<0. 05)。結(jié)論不同敏感菌的口腔上皮細(xì)胞黏附能力存在差異,菌株S. sanguis ATCC 10556黏附能力強(qiáng)于S. mutans UA159和S. sobrinus OMZ-176。唾液SC能夠抑制敏感菌對(duì)口腔上皮細(xì)胞的黏附,且對(duì)菌株S. sanguis ATCC 10556抑制能力更強(qiáng),可能與下調(diào)ALS2和ALS3基因表達(dá)相關(guān)。
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