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建立利用HPLC測(cè)定椰子胚乳乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)活性的方法。色譜柱為德國(guó)MN nucleosil C18(4.60 mm i.d×250 mm,5.0μm),流動(dòng)相為10 mmol/L磷酸二氫鉀(pH 6.7)︰甲醇=90︰10(V︰V)。結(jié)果表明:Malonyl-CoA濃度在0.02~0.12μg/mL,色譜方法有良好的線性關(guān)系,線性相關(guān)系數(shù)為0.999,Malonyl-CoA最低檢測(cè)濃度為0.02μg/mL,最終測(cè)定椰子胚乳ACCase活性為1.20ngMalonyl-CoA/min/μg酶蛋白。
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為給"甌雪60天"制種中核不育系母本9901A組培快繁提供依據(jù),以9901A花球表面花枝為外植體,采用正交設(shè)計(jì)方法對(duì)培養(yǎng)基中TDZ、BA、NAA、2,4-D 4種激素濃度配比進(jìn)行篩選。結(jié)果表明:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.001mg/L芽誘導(dǎo)率最大,為94%,但每外植體平均誘導(dǎo)芽數(shù)為1.1個(gè);MS+TDZ0.1mg/L+NAA0.001mg/L每外植體平均誘導(dǎo)芽數(shù)最大,為10個(gè),但芽誘導(dǎo)率為50%。TDZ和NAA濃度適中促進(jìn)外植體平均芽數(shù)的誘導(dǎo),過(guò)高則抑制外植體平均芽數(shù)的誘導(dǎo);2,4-D和6-BA總體表現(xiàn)為隨濃度增加而抑制外植體平均芽數(shù)的誘導(dǎo)。
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