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本實(shí)驗(yàn)以風(fēng)車草(Graptopetalum paraguayense)的葉片為材料,研究其快繁成功.結(jié)果表明:正面葉片接種于瓊脂或者M(jìn)S培養(yǎng)基上,其無(wú)菌苗培養(yǎng)出苗率最高;疏松愈傷組織和胚性愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基分別為:MS+6-BA0.5 mg/L+2,4-D0 mg/L;MS+6-BA0.5+2,4-D2.0;疏松愈傷芽誘導(dǎo)以及生根分別以:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.5mg/L;MS+IBA0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L最適.各培養(yǎng)基pH5.8,附加0.7%的瓊脂,3%蔗糖.煉苗和移栽的適當(dāng)方案為:蛭石∶珍珠巖=3∶1滅菌培養(yǎng)基質(zhì)中保濕培養(yǎng);蛭石∶珍珠巖=5∶1未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基質(zhì)中煉苗培養(yǎng).
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以假儉草為材料,對(duì)影響ISSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果的因素進(jìn)行了探討,建立了適合假儉草ISSR-PCR分析的最佳反應(yīng)體系。表明在20μL總體積中,包含40 ng模板DNA、ISSR引物0.4μmol/L、dNTPs 0.1 mmol/L、Mg2+1.0 mmol/L0、.1 UTaqDNA聚合酶和10×buffer 2.0μL。擴(kuò)增條件為:94℃預(yù)變性5 min;94℃變性45 s,55℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,35個(gè)循環(huán);72℃延伸7 min。
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