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更新時間：2024.12.28
食品中雙酚A縮水甘油醚和酚醛清漆甘油醚的測定

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建立蕃茄、涼茶、豬肉、牛奶和植物油中雙酚A縮水甘油醚(BADGE)和酚醛清漆甘油醚(NOGE)系列化合物及其氫氧化和氯化衍生物的高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。蕃茄和涼茶樣品用乙酸乙酯和正己烷(4∶1)提取;豬肉和牛奶樣品先用乙腈提取,再經(jīng)低溫過濾脫脂;植物油樣品用甲醇提取,再經(jīng)低溫過濾脫脂。在正離子模式下以電噴霧電離—串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測定。在20,50,100μg/kg 3個濃度水平進(jìn)行添加-回收率試驗,平均回收率為63.6%～120%。該方法準(zhǔn)確、高效,適合食品中BADGE和NOGE系列化合物的測定。

代謝工程改造甘油代謝途徑提高β-胡蘿卜素產(chǎn)量

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甘油是生物柴油的副產(chǎn)物,因其價格低廉和高還原性,成為生物發(fā)酵的重要碳源.為了進(jìn)一步提高工程菌對甘油的利用能力,從而提高萜類化合物的合成能力,本研究從β-胡蘿卜素高產(chǎn)菌CAR015出發(fā),對其甘油代謝途徑的多個基因進(jìn)行了調(diào)控.首先敲除了編碼3-磷酸甘油抑制子的glpR基因,然后分別用M1-37、M1-46和M1-93三個不同強(qiáng)度的人工調(diào)控元件對glpFK,glpD和tpiA三組基因進(jìn)行單基因調(diào)控和多基因組合調(diào)控.研究發(fā)現(xiàn)用M 1-46調(diào)控glpD基因后p-胡蘿卜素產(chǎn)量達(dá)到了64.82 mg/L,是CAR015的4.86倍,甘油消耗速率也提高了100％;調(diào)控tpipA基因后β-胡蘿卜素產(chǎn)量略有提高;調(diào)控glpFK基因后p-胡蘿卜素產(chǎn)量略有降低.說明G1pD是甘油代謝途徑中的關(guān)鍵限速步驟.Q-PCR結(jié)果表明,降低甘油代謝途徑的glpD和glpFK基因轉(zhuǎn)錄水平,增加tpiA基因轉(zhuǎn)錄水平,可以增加細(xì)胞生長速度、提高β-胡蘿卜素產(chǎn)量,可能是因為減少了丙酮醛毒性所致.組合調(diào)控glpD和tpiA基因,獲得β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高菌株Gly003,其p-胡蘿卜素產(chǎn)量達(dá)72.45 mg/L,產(chǎn)率達(dá)18.65 mg/g每克干細(xì)胞,分別是出發(fā)菌株CAR015的5.23倍和1.99倍.總之,GlpD是甘油代謝途徑中的關(guān)鍵限速步驟,適當(dāng)強(qiáng)度調(diào)控glpD,可以有效提高重組大腸桿菌的p-胡蘿卜素產(chǎn)量.

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