乙醇注入法制備異長(zhǎng)春花堿脂質(zhì)體的研究

目的:制備異長(zhǎng)春花堿(vinorelbinevrb)脂質(zhì)體,并對(duì)其安全性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。方法:采用薄膜分散法制備vrb脂質(zhì)體,對(duì)vrb脂質(zhì)體的急性毒性、血管刺激性及溶血性等安全因素進(jìn)行考察,并以vrb注射液為對(duì)照,比較2種制劑的半數(shù)致死量(ld50)、溶血性及血管刺激性等指標(biāo)。結(jié)果:所制備的vrb脂質(zhì)體平均粒徑158.3nm,包封率為85.3%;vrb脂質(zhì)體及注射液的ld50分別為16.02,4.16mg.kg-1;與注射液比vrb脂質(zhì)體不引起家兔溶血和紅細(xì)胞聚集反應(yīng),靜脈注射對(duì)家兔血管刺激性較vrb注射液減輕。結(jié)論:所制備的vrb脂質(zhì)體粒徑均勻,形態(tài)圓整,包封率符合《中國(guó)藥典》要求,并且和注射液比具有較高的安全性。

目的探討預(yù)防異長(zhǎng)春花堿引起靜脈炎的護(hù)理方法。方法對(duì)我科自2006年11月～2007年10月采用深靜脈picc置管應(yīng)用異長(zhǎng)春花堿的34例患者護(hù)理方法進(jìn)行分析。結(jié)果2例發(fā)生輕度靜脈炎,無滲漏發(fā)生。結(jié)論地塞米松及一些必要的護(hù)理方法對(duì)預(yù)防異長(zhǎng)春花堿引起的靜脈炎的發(fā)生有良好的效果,值得臨床推廣。

為了研究長(zhǎng)春花堿對(duì)鼠單卵裂球染色體標(biāo)本制備的影響。以長(zhǎng)春花堿為紡錘體中期阻斷劑,以czb為基礎(chǔ)培養(yǎng)液,研究不同的阻斷培養(yǎng)濃度和時(shí)間對(duì)小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)的影響。0.5μg/ml濃度、阻斷培養(yǎng)10h組的4-細(xì)胞卵裂球中期分裂相檢出率最高,而只有0.5μg/ml濃度6、h組,0.1μg/ml濃度8、h組,0.3μg/ml濃度、8h組,0.7μg/ml濃度、8h組,0.1μg/ml濃度、10h組和0.3μg/ml濃度1、0h組與最高值組差異不顯著;0.5μg/ml濃度、阻斷培養(yǎng)10h組的8-細(xì)胞卵裂球中期分裂相檢出率最高,而只有0.1μg/ml濃度1、0h組和0.7μg/ml濃度1、0h組與最高值組差異不顯著;0.1μg/ml濃度8、h阻斷培養(yǎng)的4-細(xì)胞單卵裂球的中期分裂相的檢出率與0.1μg/ml濃度1、0h阻斷培養(yǎng)的8-細(xì)胞單卵裂球的差異不顯著,其染色體標(biāo)本的制備質(zhì)量評(píng)分分別為2.7和1.90為確定適宜小鼠早期胚胎單卵裂球的長(zhǎng)春花堿處理濃度和阻斷培養(yǎng)時(shí)間提供了科學(xué)依據(jù)。

目的:對(duì)國(guó)內(nèi)外長(zhǎng)春花主栽品種的長(zhǎng)春質(zhì)堿含量和農(nóng)藝性狀進(jìn)行了分析。方法:記錄長(zhǎng)春花盛花期的農(nóng)藝性狀,反相高效認(rèn)相色譜儀測(cè)定長(zhǎng)春質(zhì)堿含量。結(jié)果:發(fā)現(xiàn)不同品種的長(zhǎng)春質(zhì)堿含量和農(nóng)藝性狀均存在很大差異,太平洋系列(pacifica)品種polkadot(ppd)中長(zhǎng)春質(zhì)堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,達(dá)到葉片干重的3.79mg·g~(-1);清涼系列(cooler)品種pink(cp)中長(zhǎng)春質(zhì)堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低,僅為葉片干重的0.9mg·g~(-1)。長(zhǎng)春花中長(zhǎng)春質(zhì)堿含量與農(nóng)藝性狀之間存在一定程度的相關(guān)性。通徑分析表明,長(zhǎng)春花主要農(nóng)藝性狀中,節(jié)間距對(duì)長(zhǎng)春質(zhì)堿含量的正影響達(dá)到了顯著水平(p<0.05),通徑系數(shù)為1.473。結(jié)論:本研究對(duì)高含量長(zhǎng)春質(zhì)堿長(zhǎng)春花引種和育種具有參考價(jià)值。

硝態(tài)氮緩解長(zhǎng)春花幼苗海水脅迫效應(yīng)的研究

本文以長(zhǎng)春花無菌苗的芽為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。適合芽誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)基為ms+0.50mg/l6-ba+0.06mg/liba+30g/l蔗糖+7g/l瓊脂;適合生根的培養(yǎng)基為1/2ms+0.10mg/liba+0.20mg/lnaa+30g/l蔗糖+7g/l瓊脂。經(jīng)生根壯苗培養(yǎng)和煉苗25d后,移栽成活率高達(dá)92%。

目的建立長(zhǎng)春花總黃酮的含量測(cè)定方法,探討不同產(chǎn)地長(zhǎng)春花中黃酮的含量水平。方法長(zhǎng)春花藥材以石油醚除去葉綠素等色素后,以甲醇熱回流提取總黃酮,經(jīng)分光光度法測(cè)定總黃酮的含量。結(jié)果該方法的的線性范圍為:8.192~40.96μg@ml-1,回收率為99.0%,適宜于長(zhǎng)春花中總黃酮的含量測(cè)定;所測(cè)定的不同產(chǎn)地長(zhǎng)春花中總黃酮的含量在0.64~2.25mg·g-1之間。結(jié)論不同產(chǎn)地的長(zhǎng)春花中總黃酮的含量水平差異非常顯著。

目的研究鹽脅迫對(duì)長(zhǎng)春花愈傷組織生長(zhǎng)及阿瑪堿積累的影響。方法用濃度為0、50、100、150mmol/l的nacl處理長(zhǎng)春花愈傷組織,測(cè)定其鮮質(zhì)量、干質(zhì)量、丙二醛(mda)量、光合速率、呼吸速率等生理指標(biāo)和阿瑪堿的量。結(jié)果鹽脅迫顯著地降低了長(zhǎng)春花愈傷組織的鮮質(zhì)量和干質(zhì)量,提高了mda量、光合速率和呼吸速率;在含有不同濃度nacl的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)30d后,愈傷組織的阿瑪堿量隨nacl濃度的增加而逐漸降低;用不同濃度的nacl溶液噴灑生長(zhǎng)27d的愈傷組織,發(fā)現(xiàn)3d后50mmol/l處理的愈傷組織中阿瑪堿量比對(duì)照高出近1倍。結(jié)論長(zhǎng)期鹽脅迫能夠抑制長(zhǎng)春花愈傷組織的生長(zhǎng),同時(shí)引起阿瑪堿積累的減少;低濃度nacl噴灑處理則對(duì)長(zhǎng)春花細(xì)胞中阿瑪堿的積累有較大的促進(jìn)作用。

對(duì)感染黃化病的海南長(zhǎng)春花植株,應(yīng)用dapi熒光顯微技術(shù)對(duì)其嫩莖和葉柄進(jìn)行了切片染色觀察,結(jié)果表明:在感病植株的韌皮部篩管分子中存在大量特異性的植原體dna熒光光點(diǎn),而在健康植株的篩管分子則未發(fā)現(xiàn)有特異性的植原體熒光。另對(duì)其莖和葉柄中的植原體含量進(jìn)行比較,結(jié)果顯示莖中的含量要比葉柄中稍高。

研究表明蕓苔素內(nèi)酯(br)對(duì)蔓長(zhǎng)春花試管苗生根有促進(jìn)作用。br使生根高峰提前、單株有效根數(shù)增多、生根率提高,iba對(duì)br有增效作用。

目的:研究大孔樹脂吸附分離純化異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的工藝,為異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。方法:采用靜態(tài)吸附-解吸方法,從10種大孔吸附樹脂篩選出最佳樹脂,另外采用單因素影響試驗(yàn),對(duì)吸附量、水洗脫體積、乙醇洗脫濃度及體積進(jìn)行了考察。結(jié)果:hpd400大孔樹脂對(duì)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的吸附及解吸附效果最好,樹脂的最佳吸附量為20.23mg.g-1,水及30%乙醇洗脫體積為6bv,70%乙醇洗脫體積為4bv。結(jié)論:該法簡(jiǎn)單可行,分離效果好,對(duì)大生產(chǎn)有一定指導(dǎo)作用。

目的測(cè)定不同產(chǎn)地小蔓長(zhǎng)春花中生物堿長(zhǎng)春胺的含量。方法采用島津cs-930雙波長(zhǎng)薄層掃描儀,單波長(zhǎng)線形掃描,以長(zhǎng)春胺為標(biāo)準(zhǔn)品,平行測(cè)定不同產(chǎn)地種植的小蔓長(zhǎng)春花中(主要是葉子)長(zhǎng)春胺的含量。結(jié)果各樣品中長(zhǎng)春胺的含量隨其生長(zhǎng)環(huán)境及生長(zhǎng)季節(jié)而不同。結(jié)論本法簡(jiǎn)便可靠,可作為小蔓長(zhǎng)春花種植及資源合理利用的檢測(cè)手段。

應(yīng)用正交試驗(yàn)對(duì)長(zhǎng)春花盆栽生產(chǎn)基質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:泥碳∶珍珠巖∶鋸木屑∶菇渣為3∶1∶2∶1(體積比)為最佳組合。

本文就長(zhǎng)春花體內(nèi)生物堿生物合成途徑中受轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控、外界因素對(duì)其誘導(dǎo)和調(diào)控以及作用機(jī)制的研究進(jìn)展作介紹。

研究了細(xì)胞質(zhì)膜鈣通道阻斷劑氯化鑭(lacl3)、胞內(nèi)ip3通道阻斷劑肝素(heparin)、胞內(nèi)cam活性抑制劑三氟啦嗪(tfp)對(duì)長(zhǎng)春花光合作用的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn):ca2+通道阻斷劑處理后長(zhǎng)春花葉片凈光合速率(pn)、psii最大量子產(chǎn)量(fv/fm)、psⅱ實(shí)際量子產(chǎn)量(yield)、電子傳遞速率(etr)、光化學(xué)淬滅系數(shù)(qp)均下降,非光化學(xué)淬滅系數(shù)(qn)及chla、chlb、chla+chlb含量上升,表明ca2+通道阻斷劑對(duì)長(zhǎng)春花的光合作用有較大影響,且不是通過加速葉片光合色素降解或抑制其合成來實(shí)現(xiàn)抑制葉片的光合能力;其中heparin處理的長(zhǎng)春花葉片相關(guān)參數(shù)變化幅度最大,表明胞內(nèi)鈣庫(kù)通過ip3通道釋放的ca2+在長(zhǎng)春花葉片光合作用過程中發(fā)揮了更積極的作用.

目的:為提高長(zhǎng)春花中有效成分生物堿的含量,利用秋水仙素誘導(dǎo)出長(zhǎng)春花同源四倍體,為獲得優(yōu)質(zhì)長(zhǎng)春花四倍體株系打下基礎(chǔ)。方法:以秋水仙素為誘導(dǎo)劑,對(duì)實(shí)生苗頂芽進(jìn)行處理,考察不同濃度和不同的處理時(shí)間對(duì)誘導(dǎo)率的影響。對(duì)獲得的變異株通過形態(tài)、染色體計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)等方法進(jìn)行鑒定,篩選出同源四倍體。結(jié)果:毛細(xì)管法誘導(dǎo)實(shí)體幼苗的頂芽效果較好,0.1%秋水仙素處理72h和0.2%處理48h,四倍體的誘導(dǎo)率分別達(dá)到46%和58%。各處理組共獲得四倍體38株,四倍體的性狀發(fā)生了明顯變化,莖、葉、花、果變大,四倍體單株干重也高于二倍體。

目的:獲得膽木莖木、皮及葉中有效成分異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量高低的研究結(jié)果,為挖掘膽木新的藥用部位奠定科學(xué)基礎(chǔ)。方法:采用薄層色譜法,對(duì)膽木的莖木、皮、葉中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別;同時(shí)采用高效液相色譜技術(shù)對(duì)該3個(gè)部位中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量高低進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:膽木莖木、皮及葉的薄層色譜圖中均出現(xiàn)異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺藍(lán)色熒光斑點(diǎn);且莖木、皮、葉中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量值分別為1.22%,1.08%,1.54%。結(jié)論:定性鑒別和含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明:膽木莖木、皮、葉中均含有效成分異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺,且葉中含量相對(duì)較高、皮中含量相對(duì)較低。

文多靈(vindoline)具有重要的藥用價(jià)值。本文利用反相高效液相色譜法檢測(cè)了23種國(guó)內(nèi)外長(zhǎng)春花主栽品種的文多靈含量,對(duì)文多靈含量與品種的12個(gè)主要農(nóng)藝性狀(包括株高、節(jié)間距、莖直徑、一級(jí)側(cè)枝數(shù)、葉片長(zhǎng)、葉片寬、葉片長(zhǎng)寬比、百片葉重、全株葉片重、花瓣直徑、種莢長(zhǎng)度和種子數(shù)/莢)的相關(guān)性和通徑進(jìn)行了分析。相關(guān)性分析表明,文多靈含量與一級(jí)側(cè)枝數(shù)、莖直徑、節(jié)間距、葉片寬、株高、全株葉片重、百片葉重、花瓣直徑和葉片長(zhǎng)呈正相關(guān),其中與一級(jí)側(cè)枝數(shù)和莖直徑的相關(guān)性達(dá)到顯著水平(p<0.05),與節(jié)間距的相關(guān)性接近顯著水平;與葉片長(zhǎng)寬比、種莢長(zhǎng)度和種子數(shù)/莢呈負(fù)相關(guān)。通徑分析結(jié)果表明,長(zhǎng)春花的主要農(nóng)藝性狀中,節(jié)間距、一級(jí)側(cè)枝數(shù)和全株葉片重對(duì)文多靈含量的正影響達(dá)到了顯著水平(p<0.05),通徑系數(shù)分別為0.959、0.716和0.431,說明節(jié)間距、一級(jí)側(cè)枝數(shù)和全株葉片重可以作為高含量文多靈長(zhǎng)春花品種選育的重要參考指標(biāo)。

在銀川地區(qū)引種雜交矮化長(zhǎng)春花catharanthusniraanaapricot等12個(gè)品種,進(jìn)行種苗培育,觀察其生長(zhǎng)發(fā)育過程中的性狀表現(xiàn).探求各品種在本地區(qū)環(huán)境條件和栽培管理?xiàng)l件下,不同品種之間品質(zhì)差異.結(jié)果表明:12個(gè)品種均能適應(yīng)銀川地區(qū)栽培;嫩枝帶葉扦插成活率較高;且溫室栽培生長(zhǎng)發(fā)育良好.植株矮化,豐滿,花大,色艷.

以藥用植物長(zhǎng)春花為研究對(duì)象,通過施加不同濃度硝態(tài)氮,揭示其體內(nèi)長(zhǎng)春堿積累受氮水平的調(diào)控特征及其與內(nèi)源碳/氮(c/n)代謝的聯(lián)系。結(jié)果表明,中等濃度的氮水平能顯著誘導(dǎo)根系和葉片中硝酸還原酶活性的提高,并且該效應(yīng)依賴于處理時(shí)間,處理12h后其誘導(dǎo)效果最為顯著。對(duì)比氮代謝,測(cè)定了葉片中蔗糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù),在外施18mmol·l-1no-3溶液后6h內(nèi)蔗糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于對(duì)照水平,之后又升高至對(duì)照水平。hplc檢測(cè)葉片中長(zhǎng)春堿的結(jié)果顯示,經(jīng)不同濃度硝態(tài)氮處理2h后顯著誘導(dǎo)長(zhǎng)春堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加。

采用不同比例的甲醇-1%二乙胺(ph7.5)、甲醇-1%碳酸銨、乙腈-1%二乙胺(ph7.5)、乙腈-1%碳酸銨為流動(dòng)相,在比對(duì)保留時(shí)間的基礎(chǔ)上加以光譜確認(rèn),并對(duì)小蔓長(zhǎng)春花提取液中長(zhǎng)春胺保留時(shí)間及其分離情況進(jìn)行研究,以選擇測(cè)定長(zhǎng)春胺的最佳流動(dòng)相體系。結(jié)果顯示:在甲醇-碳酸銨、乙腈-碳酸銨、乙腈-二乙胺體系中,長(zhǎng)春胺峰很難完全分離,其光譜掃描結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品不一致;而在甲醇-二乙胺體積比為65∶35時(shí),長(zhǎng)春胺峰可實(shí)現(xiàn)基線分離,其光譜掃描結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品一致,且長(zhǎng)春胺在0.05~0.5g/l范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r2=0.997),平均加樣回收率為100.71%(n=5),rsd=2.23%。研究表明,甲醇-1%二乙胺(體積比為65∶35,ph7.5)為測(cè)定小蔓長(zhǎng)春花中長(zhǎng)春胺含量的最佳流動(dòng)相體系,可用于小蔓長(zhǎng)春花藥材的質(zhì)量監(jiān)控。