中國(guó)石竹離體快繁與試管苗玻璃化

研究了大量元素濃度、瓊脂濃度、光照對(duì)麗佳秋海棠試管苗玻璃化的影響,結(jié)果表明:不同培養(yǎng)條件對(duì)麗佳秋海棠試管苗玻璃化影響的程度不同,適當(dāng)減少大量元素的用量、提高瓊脂濃度和光照強(qiáng)度,可有效地降低玻璃化苗的數(shù)量,且對(duì)麗佳秋海棠試管苗增殖、生長(zhǎng)、生根有較好的促進(jìn)效果。

[目的]研究大果紫檀試管苗出現(xiàn)玻璃化的影響因素。[方法]以大果紫檀的無(wú)菌種子苗為材料,研究ms培養(yǎng)基附加不同激素組合及改良ms培養(yǎng)基中nh+4離子、ga2+離子濃度對(duì)大果紫檀試管苗玻璃化的影響。[結(jié)果]當(dāng)tdz濃度大于0.03mg/l時(shí),大果紫檀玻璃化比率會(huì)大幅上升,而kt不會(huì)導(dǎo)致大果紫檀試管苗出現(xiàn)玻璃化;適當(dāng)降低培養(yǎng)基中nh+4離子濃度及提高ga2+離子濃度,也能降低試管苗玻璃化發(fā)生的比例。[結(jié)論]激素種類和濃度是影響大果紫檀試管苗玻璃化的主要因素,低濃度的tdz既能高效誘導(dǎo)大果紫檀試管苗增殖,又能使試管苗的玻璃化比率處于較低的水平。

采用分離群體分組分析法(bsa),用100個(gè)隨機(jī)引物對(duì)滿天星的正常苗和玻璃化苗進(jìn)行rapd分析的結(jié)果表明,7個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增出多態(tài)性差異條帶。再用上述7個(gè)引物分別對(duì)試管苗及其玻璃化苗個(gè)體進(jìn)行dna的pcr擴(kuò)增的結(jié)果顯示,引物j20在2種苗中出現(xiàn)差異條帶。

以色素萬(wàn)壽菊種子萌發(fā)苗為外植體,對(duì)色素萬(wàn)壽菊試管苗玻璃化現(xiàn)象進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:防止色素萬(wàn)壽菊試管苗玻璃化的有效措施為:使用0.1mg/l6-ba,添加0.01mg/lnaa;采用濃度50g/l的蔗糖;采用濃度1.2%的瓊脂;添加濃度0.1%的活性炭;采用濃度1.8g/l的聚乙烯醇。

在本文中利用解剖學(xué)方法,對(duì)滿天星試管正常苗和玻璃苗葉片解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察比較,結(jié)果表明:二者的表皮均由單層細(xì)胞構(gòu)成,氣孔突出,葉肉組織無(wú)細(xì)胞的分化,是等面葉,且葉肉中通氣組織發(fā)達(dá)。與試管正常苗相比,玻璃苗的葉片厚,氣孔突出明顯,表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞體積膨大,有的葉肉細(xì)胞的細(xì)胞壁發(fā)育不全,在某些區(qū)域出現(xiàn)空洞,壁的形態(tài)呈現(xiàn)不完整的現(xiàn)象。玻璃苗葉片的維管組織呈現(xiàn)退化的狀態(tài)。

以菊花組培苗為試材,對(duì)菊花玻璃化苗和正常苗的生理特性進(jìn)行比較。測(cè)定了組織含水量、葉綠素、可溶性糖、蔗糖、可溶性蛋白5個(gè)指標(biāo)。玻璃化苗的組織含水量、可溶性糖含量高于正常苗,葉綠素a、葉綠素b、蔗糖、可溶性蛋白含量明顯低于正常苗。說(shuō)明玻璃化苗與正常苗在光合能力、蛋白質(zhì)合成和糖代謝方面顯著不同。

通過在培養(yǎng)基中加入不同質(zhì)量濃度6-ba、naa、蔗糖、瓊脂、活性碳并進(jìn)行正交試驗(yàn),得出影響紅檵木玻璃化苗發(fā)生的因素及其影響力大小順序?yàn)?-ba>活性碳>瓊脂>naa>蔗糖。6-ba的質(zhì)量濃度大于2mg/l,會(huì)大大增加玻璃化苗的產(chǎn)生?？紤]到增殖率,應(yīng)適當(dāng)加入少量活性碳或聚乙烯醇。此外,減少繼代次數(shù),選擇中部節(jié)段作為外植體,也有利于玻璃化率的降低。

面包面團(tuán)分別貯存在家用冰箱(-18℃,非玻璃態(tài)貯存)和超低溫冰箱(-88℃,玻璃態(tài)貯存)中,采用質(zhì)構(gòu)儀分析面團(tuán)在貯存0、7、30、90d后的面團(tuán)質(zhì)構(gòu)特性,并測(cè)定面包比體積。結(jié)果表明:(1)非玻璃態(tài)貯存面團(tuán)的黏度、延展性先升高后降低,變化幅度大,而面團(tuán)彈性、彈性恢復(fù)比快速下降;(2)玻璃態(tài)貯存面團(tuán)的黏度、延展性先降低,而后緩慢升高,面團(tuán)彈性隨貯存時(shí)間小幅下降、彈性恢復(fù)比基本無(wú)變化;(3)面包比體積變化情況與面團(tuán)彈性變化情況相似,說(shuō)明面團(tuán)的彈性能較好地反映面包的比體積。玻璃態(tài)貯存可以降低重結(jié)晶反應(yīng)速率,減少大冰晶生成,降低面團(tuán)在貯存過程中的面筋網(wǎng)絡(luò)破壞;可以降低面團(tuán)中水分活性,減小水分遷移速率,防止淀粉過度水化。

【目的】解決櫻桃砧木吉賽拉組培快繁生產(chǎn)中玻璃化苗發(fā)生及污染問題?！痉椒ā客ㄟ^對(duì)培養(yǎng)基中激素、蔗糖、瓊脂濃度的調(diào)節(jié)及培養(yǎng)溫度的控制,防止玻璃化苗發(fā)生;通過培養(yǎng)基中加入殺菌劑,尋求解決組培苗污染?！窘Y(jié)果】培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素6-ba的濃度控制在1mg/l以下、蔗糖濃度40g/l、瓊脂濃度6g/l左右、培養(yǎng)溫度24℃左右,可有效地預(yù)防玻璃化苗的發(fā)生;在培養(yǎng)基中加入500～1000mg/l多菌靈50%可濕性粉劑,可有效防止污染的發(fā)生。【結(jié)論】在櫻桃砧木吉賽拉5號(hào)組培快繁中,細(xì)胞分裂素6-ba濃度、蔗糖濃度、瓊脂濃度、培養(yǎng)溫度對(duì)試管苗產(chǎn)生玻璃苗都有一定的影響,其中,細(xì)胞分裂素6-ba濃度、培養(yǎng)溫度的影響更為明顯。為了防止污染的發(fā)生,培養(yǎng)基中添加多菌靈50%可濕性粉劑效果較好。

以網(wǎng)紋甜瓜品種‘中蜜1號(hào)’為試材,在其不同培養(yǎng)階段添加不同濃度agno3,檢測(cè)不定芽的誘導(dǎo)率和增殖率、玻璃苗發(fā)生率和生根情況的結(jié)果表明,添加agno3后,子葉的愈傷組織誘導(dǎo)率下降,添加70μmol·l-1agno3可促進(jìn)不定芽的誘導(dǎo),50～60μmol·l-1agno3明顯促進(jìn)不定芽增殖,并完全抑制玻璃苗的產(chǎn)生,添加50μmol·l-1agno3的生根最好。

非洲茉莉組織培養(yǎng)以帶莖尖莖段為最佳外植體;6-ba2.0mg/l+naa0.1mg/l的組合誘導(dǎo)率最高,頂芽誘導(dǎo)率達(dá)83.3%,不定芽誘導(dǎo)率達(dá)43.3%;在6-ba2.0mg/l+kt0.1mg/l+naa0.1mg/l培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代,增殖倍數(shù)最高可達(dá)4倍;ms附加iba0.5mg/l誘導(dǎo)生根最為適宜,生根率達(dá)98%。

玻璃化溫度 復(fù)材030劉倩0311627 玻璃化轉(zhuǎn)變是高聚物的一種普遍現(xiàn)象，因?yàn)榧词故墙Y(jié)晶高聚物，也難以形 成100％的結(jié)晶，總有非晶區(qū)存在。在高聚物發(fā)生玻璃化轉(zhuǎn)變時(shí)，許多物理性能 發(fā)生了急劇的變化特別是力學(xué)性能。在只有幾度范圍的轉(zhuǎn)變溫度區(qū)間前后，模量 將改變?nèi)剿膫€(gè)數(shù)量級(jí)，使材料從堅(jiān)硬的固體，突然變成柔軟的彈性體，完全改 變了材料的使用性能。作為塑料使用的高聚物，當(dāng)溫度升高到發(fā)生玻璃化轉(zhuǎn)變時(shí)， 失去了塑料的性能，變成了橡膠；而作為橡膠使用的材料，當(dāng)溫度降低到發(fā)生玻 璃化轉(zhuǎn)變時(shí)，便喪失橡膠的高彈性，變成硬而脆的塑科。因此，玻璃化轉(zhuǎn)變是高 聚物的一個(gè)非常重要的性質(zhì)。研究玻璃化轉(zhuǎn)變現(xiàn)象，有著重要的理論和實(shí)際意義。 而玻璃化溫度是在決定應(yīng)用一個(gè)非晶高聚物之前需要知道的一個(gè)最重要的 參數(shù)，如何測(cè)量這一參數(shù)自然也是很重要的。另一方面對(duì)玻璃化轉(zhuǎn)變現(xiàn)象的研究， 也必須解決

由于面團(tuán)在冷凍儲(chǔ)存過程中受到結(jié)晶與再結(jié)晶的影響,產(chǎn)生結(jié)構(gòu)松弛和水份遷移,品質(zhì)顯著下降。實(shí)現(xiàn)面團(tuán)的玻璃化儲(chǔ)存是解決問題的最佳方案。通過加入合適添加劑,可提高面團(tuán)玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,實(shí)現(xiàn)一般冷凍儲(chǔ)存溫度(-18℃)下的面團(tuán)玻璃化儲(chǔ)存。分析了各種玻璃化轉(zhuǎn)變溫度測(cè)定方法和添加劑在提高面團(tuán)玻璃化轉(zhuǎn)變方面的應(yīng)用。

試管離心管等玻璃儀器的干燥、保管知識(shí)和洗滌妙法 點(diǎn)擊次數(shù)：651發(fā)布日期：2010-3-10來(lái)源：本站僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù) 一、玻璃儀器的干燥 做實(shí)驗(yàn)經(jīng)常要用到的儀器應(yīng)在每次實(shí)驗(yàn)完畢之后洗凈干燥備用。用于不同實(shí)驗(yàn)的儀器對(duì)干燥有不同的要求， 一般定量分析中的燒杯、錐形瓶等儀器洗凈即可使用，而用于有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)或有機(jī)分析的儀器很多是要求 干燥的，有的要求無(wú)水跡，有的要求無(wú)水。應(yīng)根據(jù)不同要求來(lái)干燥儀器。 1、晾干（控干）不急用的，要求一般干燥，可在純水涮洗后，在無(wú)塵處倒置挖去水分，然后自然干燥?？?用安有斜木釘?shù)募茏雍蛶в型笟饪椎牟ＡЧ穹胖脙x器。 2、烘干洗凈的儀器控去水分，放在電烘箱中烘干，烘箱溫度為105—120℃烘1h左右。也可放在紅外燈干燥 箱中烘干。此法適用于一般儀器。稱量用的稱量瓶等烘干后要放在干燥器中冷卻和保存。帶實(shí)心玻璃塞的 及厚壁儀器烘干時(shí)要注意慢慢

比較了玻璃化與包埋玻璃化超低溫保存懷地黃[rehmanniaglutinosa(gaertn.)libosch]‘85-5’帶芽莖段的效果。結(jié)果表明:4℃低溫鍛煉5d,在添加二甲基亞砜(dmso)和乙酰胺的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)3d,60%pvs2室溫裝載25min,pvs20℃脫水30min時(shí),玻璃化和包埋玻璃化兩種保存方法均得到本試驗(yàn)條件下最佳結(jié)果;兩種方法相比,玻璃化法的存活率和再生率均較包埋玻璃化法高,前者的存活率(88.92%)和再生率(64.29%)分別是后者的1.38倍和2.41倍?？梢?采用超低溫保存懷地黃種質(zhì)資源是可行的,且玻璃化法優(yōu)于包埋玻璃化法。

玻璃化學(xué)強(qiáng)化介紹

利用非試管快繁技術(shù),對(duì)廣西橫縣"中華茉莉園"9個(gè)茉莉品系及11個(gè)茉莉家族成員品系進(jìn)行了快繁試驗(yàn)研究。結(jié)果表明,絕大部分品系在非試管快繁苗床生根率達(dá)到75%以上,17個(gè)品系移栽成活率超過90%,僅越南茉莉一個(gè)品系移栽成活率僅為74.6%。從整個(gè)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,非試管快繁技術(shù)能有效繁育各種茉莉及其家族成員品系,這將為"中華茉莉園"茉莉品系保護(hù)和廣西橫縣茉莉產(chǎn)業(yè)發(fā)展打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

為探討不同培養(yǎng)條件對(duì)白花丹參組培苗玻璃化的影響,以白花丹參不育變異品種的幼嫩莖段為外植體,以ms為基本培養(yǎng)基,研究了kt/naa比例、活性炭添加及瓊脂濃度對(duì)防治白花丹參組培苗玻璃化現(xiàn)象的作用。結(jié)果表明,當(dāng)kt濃度為1.5mg.l-1、naa濃度為0.5mg.l-1、培養(yǎng)基中添加0.3%活性炭、瓊脂濃度為0.8%時(shí),白花丹參組培苗增殖系數(shù)較高,玻璃化率低,煉苗成功率最高。因此,ms+kt1.5mg.l-1+naa0.5mg.l-1+瓊脂0.8%+活性炭0.3%的培養(yǎng)基可以有效防治白花丹參組織培養(yǎng)中的玻璃化現(xiàn)象。

玻璃化是非受傷脅迫條件下試管苗的一種生理病變,試管苗的玻璃化,嚴(yán)重影響了微體快速繁殖的效率。綜述國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),木本植物試管苗玻璃化的形成,與培養(yǎng)基中糖(碳源)濃度、瓊脂種類及濃度、離子(主要為cu2+)含量、細(xì)胞分裂素、乙烯及生長(zhǎng)素等因子有關(guān);過氧化物酶-iaa氧化酶體系對(duì)乙烯釋放的控制,苯丙氨酸解氨酶和酸性過氧化物酶活性降低對(duì)木質(zhì)化過程進(jìn)行的抑制以及纖維素、木質(zhì)素的缺乏,細(xì)胞壁壓的降低等,均使得細(xì)胞過分吸水,從而導(dǎo)致木本植物玻璃化的發(fā)生。國(guó)內(nèi)外試管苗玻璃化的控制技術(shù)主要有:增加固體培養(yǎng)基中瓊脂濃度和蔗糖含量;降低培養(yǎng)基中cl-、nh4+的濃度及細(xì)胞分裂素含量,或向培養(yǎng)基中加入間苯三酚或根皮苷;材料需經(jīng)低溫處理并降低環(huán)境中的相對(duì)濕度。

利用組織培養(yǎng)繁殖滿天星，既能保持原品種固有的優(yōu)良特性，又可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量苗木，是滿天星快速繁殖的一種有效方法〔１〕。但是滿天星在繼代培養(yǎng)中，很容易發(fā)生玻璃化苗，影響試管苗生根和移栽，降低了繁殖系數(shù)。在試管苗繼代培養(yǎng)中玻璃化苗的產(chǎn)生除與培養(yǎng)條件有...

香石竹（dianthuscaryophyfllusl.）為石竹科石竹屬常綠亞灌木花卉,是世界著名的切花之一,其栽培種及野生種的資源有效保存對(duì)香石竹的國(guó)產(chǎn)化至關(guān)重要。超低溫保存（-196℃）是無(wú)性繁殖的植物種質(zhì)資源最安全經(jīng)濟(jì)的保存方法。超低溫保存方法中常用的為玻璃化法,近年來(lái)在傳統(tǒng)玻璃化法上發(fā)展出來(lái)小液滴法,即將植物材料經(jīng)玻璃化處理后,在鋁箔上滴成小液滴,后直接投入液氮進(jìn)行迅速冷凍。由于凍存及解凍速度快,組織不易形成冰晶,易成活再生,是一有發(fā)展前景的方法。超低溫保存中,莖尖大小及結(jié)構(gòu)的完整性對(duì)超低溫保存的成活率及恢復(fù)培養(yǎng)均有影響。我們以香石竹為模式植物,結(jié)合包埋法及小液滴法的特點(diǎn),對(duì)相關(guān)技術(shù)進(jìn)行改進(jìn),探索一種適用于植物莖尖超低溫保存方法及冷凍植株后再生的技術(shù)。試材為香石竹紅花品種,從上?；ɑ苁袌?chǎng)購(gòu)買。切取花莖繁殖試管苗,獲得花莖無(wú)性繁殖系。取組培繼代3個(gè)月以上的無(wú)菌組培苗。莖尖超低溫保存的試驗(yàn)方法為：1、常規(guī)玻璃化法：（1）剝?nèi)?～2mm無(wú)菌苗莖尖,接種到含0.3mol·l-1蔗糖濃度的ms培養(yǎng)基中,在25℃下培養(yǎng)1～3d;（2）經(jīng)預(yù)培養(yǎng)后,將莖尖置于含預(yù)處理液（含2mol·l-1甘油及0.4mol·l-1蔗糖的ms培養(yǎng)液）的2ml冷凍管中,于室溫下處理60min,然后將預(yù)處理液吸出,換入預(yù)冷玻璃化保護(hù)劑pvs2中在冰浴中處理60～120min;（3）冷凍管換入預(yù)冷新鮮pvs2約0.5ml,迅速投入液氮中保存。解凍取出在液氮中凍存1h以上的冷凍管,立即放入40℃水浴中快速解凍2min。（4）莖尖在室溫下用含1.2mol·l-1蔗糖的ms培養(yǎng)液洗滌2～3次,每次5～10min。（5）洗滌后的莖尖在濾紙上吸干后,轉(zhuǎn)移至恢復(fù)培養(yǎng)基中暗培養(yǎng),等莖尖返綠并有萌動(dòng)跡象時(shí)再轉(zhuǎn)入ms固體培養(yǎng)基中常光培養(yǎng)。2、小液滴法：步驟（1）、（2）同常規(guī)玻璃化法;（3）在凍存前5min將含有1個(gè)莖尖的液滴（約5ul）滴在5mm×20mm的無(wú)菌鋁箔條上,每個(gè)鋁箔條含5個(gè)莖尖,將含液滴的鋁箔條直接投入裝滿液氮的安培管中。（4）解凍時(shí)直接將含液滴的鋁箔條投入洗滌液中進(jìn)行解凍20min。步驟（5）同上。3、改良小液滴法：（1）剝?nèi)?～2mm無(wú)菌苗莖尖,浸入2%的無(wú)鈣離子海藻酸鈉溶液中輕蘸,即用鑷子將莖尖輕放在3mm×20mm無(wú)菌濾紙小條上,每個(gè)濾紙條上放5～10個(gè)莖尖;（2）將含有莖尖的濾紙小條浸入到0.1%氯化鈣溶液中,經(jīng)10min固定,在無(wú)菌濾紙上吸干多余液體;（3）將帶有莖尖的濾紙小條放入0.3mol·l-1蔗糖的ms液體或固體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)1～3d;（4）經(jīng)預(yù)培養(yǎng)后,將帶有莖尖的濾紙小條置于預(yù)處理液（含2mol·l-1甘油及0.4mol·l-1蔗糖的ms培養(yǎng)液）中于室溫下處理60min,然后轉(zhuǎn)入玻璃化保護(hù)劑pvs2中在冰浴中處理60～120min;（5）將帶有莖尖的濾紙小條直接投入液氮中,長(zhǎng)期保存可轉(zhuǎn)移至無(wú)菌冷凍管;（6）解凍時(shí)將帶有莖尖的濾紙小條由管中拿出后迅速放入含1.2mol·l-1蔗糖的ms培養(yǎng)液解凍及洗滌20min;（7）將帶莖尖的濾紙條在無(wú)菌濾紙上吸干后放入恢復(fù)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),經(jīng)恢復(fù)培養(yǎng)后莖尖可直接生長(zhǎng)成植株。結(jié)果表明：3種玻璃化法凍存的香石竹莖尖成活率及再生率均可達(dá)80%。其中小液滴玻璃化法在優(yōu)化程序下進(jìn)行凍存,最高存活率可達(dá)95%,高于常規(guī)玻璃化法（82%）及改良小液滴玻璃化法（87%）?；謴?fù)培養(yǎng)時(shí),最快1d即可見莖尖萌動(dòng),再生時(shí)間較常規(guī)玻璃化法要短3～5d,但再生率不穩(wěn)定（60%～100%）,易形成愈傷組織及玻璃化苗。改良小液滴法成活率（80%～90%）略高于常規(guī)玻璃化法,再生時(shí)間與常規(guī)玻璃化法相同（7～13d）,植株再生率均在80%以上且植株生長(zhǎng)健壯一致。改良小液滴法結(jié)合包埋法及小液滴法的特點(diǎn),并采用濾紙小條為操作載體,以批量處理莖尖以提高操作效率,減少在操作過程中機(jī)械損傷,從而達(dá)到穩(wěn)定的成活率及再生率,受操作者水平影響較小,可用于種質(zhì)庫(kù)批量化植物莖尖資源超低溫保存。

在培養(yǎng)基為ms+iaa1.0mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂5.5g/l,ph5.8～6.0;培養(yǎng)條件為25～27℃/12h,給光(2000lx)、19～20℃/12h,不給光,采用瓶?jī)?nèi)單芽莖段增殖路線,可以有效地控制香石竹、滿天星在組培快繁中極易出現(xiàn)的玻璃化現(xiàn)象。