旱柳SRAP-PCR體系建立與優(yōu)化

以假儉草葉片dna為模板,采用正交試驗設(shè)計,以mg2+、dntp、引物和taqdna聚合酶4種因素3個水平,對假儉草srap反應(yīng)體系進行研究,并比較了不同濃度模板dna對擴增效果的影響,建立了假儉草的srap最佳反應(yīng)體系。結(jié)果表明,假儉草srap-pcr最佳反應(yīng)體系為:2μl10×pcrbuffer、60ng模板dna、mg2+1.50mmol/l、dntp260μmol/l、引物0.25μmol/l、taqdna聚合酶0.5u,總體積為20μl。各因素對擴增反應(yīng)結(jié)果均有不同影響,其中以mg2+濃度影響最大,taqdna聚合酶的影響最小。運用該體系對4份假儉草種源進行驗證,證明該體系穩(wěn)定可靠,并從45個srap引物組合中篩選出擴增條帶清晰、多態(tài)性豐富的26個引物組合。這一體系的建立及多態(tài)性引物組合的篩選為今后利用srap標記技術(shù)進行假儉草分子遺傳學(xué)研究提供了科學(xué)依據(jù)。

分別采用單因子試驗和正交設(shè)計試驗對影響紅花檵木rsap-pcr反應(yīng)體系的5個因素(dna模板量、mg2+濃度、dntps濃度、引物濃度、taq酶量)在4個水平上進行優(yōu)化.結(jié)果表明,2種方法得到的影響因素的最優(yōu)水平存在差異,通過綜合比較與分析,選取紅花檵木rsap-pcr最優(yōu)反應(yīng)體系為:在25μl的反應(yīng)體系中,模板量70ng,mg2+濃度1.50mmol/l,dntps濃度0.25mmol/l,引物濃度0.20mmol/l,taq酶量2.50u.

以假儉草為材料,對影響issr-pcr擴增結(jié)果的因素進行了探討,建立了適合假儉草issr-pcr分析的最佳反應(yīng)體系。表明在20μl總體積中,包含40ng模板dna、issr引物0.4μmol/l、dntps0.1mmol/l、mg2+1.0mmol/l0、.1utaqdna聚合酶和10×buffer2.0μl。擴增條件為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性45s,55℃退火45s,72℃延伸1.5min,35個循環(huán);72℃延伸7min。

為建立鵝掌楸簡單序列重復(fù)區(qū)間擴增issr的pcr優(yōu)化反應(yīng)體系,以鵝掌楸葉片基因組dna為材料,系統(tǒng)地測試了模板dna、引物、dntps、mg2+濃度、taqdna聚合酶用量及退火溫度對issr-pcr反應(yīng)體系的影響。結(jié)果表明:優(yōu)化的pcr反應(yīng)體系為:20μl總體系中,含30ng模板dna,0.3μmol.l-1隨機引物,0.2mmol.l-1dntps,1.4mmol.l-1mg2+,0.8utaqdna聚合酶;最佳退火溫度為60℃;pcr反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min,60℃退火45s,72℃延伸2min;45個循環(huán);72℃再延伸7min。

以西洋杜鵑(rhododendronhybridum)葉片提取的基因組dna為材料,用引物ubc880(序列為ggagaggagaggaga)研究了pcr反應(yīng)體系的主要成分及退火溫度對該種植物issr擴增結(jié)果的影響。確立了可用于西洋杜鵑issr-pcr分析的最適宜的pcr反應(yīng)體系:20μlpcr反應(yīng)體積中,含10ng模板dna,0.25mmol.l-1dntps,2.0mmol.l-1mg2+,1.0utaqdna聚合酶,0.4μmol.l-1引物,并確定引物ubc880的最適退火溫度為54.4℃。pcr擴增程序:94℃預(yù)變性5min,94℃變性45s,54.4℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40個循環(huán)后,72℃延伸7min,4℃保存。應(yīng)用該issr體系對11份西洋杜鵑種質(zhì)進行了擴增,證實了該體系的適用性和穩(wěn)定性。

采用單因子試驗和正交設(shè)計方法,對影響闊葉十大功勞issr-pcr反應(yīng)體系的引物、taqdna聚合酶、dntps、模板dna及退火溫度5個因素進行優(yōu)化,為探討闊葉十大功勞種質(zhì)遺傳多樣性奠定基礎(chǔ).結(jié)果表明:闊葉十大功勞issr-pcr的最佳反應(yīng)體系為:在20μl反應(yīng)體系中,0.5μmol/l引物、0.5utaq酶、150μmol/ldntps和20ng模板dna.在最佳反應(yīng)條件下,從80條引物中篩選出15條擴增穩(wěn)定、多態(tài)性豐富的issr引物,并經(jīng)過9份闊葉十大功勞種質(zhì)檢驗,證明該體系具有擴增條帶清晰、穩(wěn)定、重復(fù)性好等優(yōu)點.綜上所述,本文所建立的issr-pcr反應(yīng)體系可用于闊葉十大功勞的種質(zhì)鑒定及遺傳多樣性分析.

issr標記能揭示出種間、種內(nèi)遺傳變異情況,更好地揭示親緣關(guān)系和遺傳多樣性。以大花萱草的5個品種為試材,研究了影響大花萱草issr-pcr擴增效果的各項因素,建立了適合大花萱草issr-pcr的最佳反應(yīng)體系:20μl反應(yīng)體系中,10×buffer2μl,dntp0.2mmol/l,mg2+濃度1.5mmol/l,引物濃度0.5mmol/l,taq酶10.002nkat,dna模板20ng。大花萱草的最佳issr擴增反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性40s,50℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40個循環(huán);最后72℃延伸10min。通過該反應(yīng)程序進行的大花萱草issr擴增可獲得清晰、穩(wěn)定的條帶。

采用單因子試驗與正交試驗的方法,研究了海南龍血樹(dracaenacambodianapierreexgagnep)issr-pcr反應(yīng)體系中的主要影響因子,篩選出16條有效引物并優(yōu)化了它們的退火溫度,此外還檢測了體系的重復(fù)性。優(yōu)化后的25μl反應(yīng)體系包含:10×pcrbuffer2.5μl,3.0mmol/lmgcl2,300μmol/ldntps,taq聚合酶3.0u,引物0.2μmol/l,dna模板20ng。該反應(yīng)體系可用于海南龍血樹的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的分析。

一、砧木的選擇。(一)嫁接親和力:從樹木學(xué)的角度分析,旱柳和垂柳同屬楊柳科柳屬。生產(chǎn)實踐證明,與垂柳親和力的排名依次為旱柳、金絲柳、黃柳。(二)生物學(xué)特性:旱柳還具有根系發(fā)達、干性良好、壽命長、抗病蟲害

對影響三角梅issr-pcr擴增反應(yīng)的各個參數(shù)進行優(yōu)化,建立適合三角梅的issr反應(yīng)體系:pcr反應(yīng)體積為20μl,其中10×buffer(含mg2+)2.0μl,dntp250μmol/l,taq酶1.0u,引物0.3μmol/l,模板dna20ng。擴增程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min,51.6℃退火1min,72℃延伸2min,34個循環(huán);最后72℃延伸7min。該反應(yīng)體系標記點位清晰、穩(wěn)定、重復(fù)性好,適宜三角梅issr分析,為應(yīng)用issr技術(shù)鑒定三角梅種質(zhì)資源、分子標記輔助選擇育種及其遺傳多樣性研究奠定了基礎(chǔ)。

對影響三角梅issr-pcr擴增反應(yīng)的各個參數(shù)進行優(yōu)化,建立適合三角梅的issr反應(yīng)體系:pcr反應(yīng)體積為20μl,其中10×buffer(含mg2+)2.0μl,dntp250μmol/l,taq酶1.0u,引物0.3μmol/l,模板dna20ng。擴增程序:94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min,51.6℃退火1min,72℃延伸2min,34個循環(huán);最后72℃延伸7min。該反應(yīng)體系標記點位清晰、穩(wěn)定、重復(fù)性好,適宜三角梅issr分析,為應(yīng)用issr技術(shù)鑒定三角梅種質(zhì)資源、分子標記輔助選擇育種及其遺傳多樣性研究奠定了基礎(chǔ)。

以蠟狀芽孢桿菌(bacilluscereus)為試驗材料,比較細菌基因組dna的提取方法。將eric-pcr應(yīng)用于醋液分離菌的研究,對此反應(yīng)體系的主要因素進行優(yōu)化,最終建立了適合于此菌種的eric-pcr體系。采用改良的傳統(tǒng)細菌基因組dna提取方法,所提取的dna質(zhì)量較高,能夠滿足eric-pcr反應(yīng)的需要。反應(yīng)體系:25μl反應(yīng)體積10×擴增緩沖液(含mg2+)2.5μl,20pmol/μleric-pcr引物e11μl,20pmol/μleric-pcr引物e21μl,dna模板2μl,2.5mmol/ldntps混合液2.0μl,taq聚合酶1.1μl,雙蒸水補齊;pcr反應(yīng)程序為:94℃變性3min,1個循環(huán);94℃變性30s,55℃退火40s,72℃延伸1min,30個循環(huán);72℃延伸4min。

建立完整bim軟件體系概念 摘要：bim技術(shù)應(yīng)用于國內(nèi)建設(shè)項目至今天已經(jīng)進入一個快車道，但 是大量的從業(yè)者對于bim技術(shù)的印象還是停留在一款軟件應(yīng)用上，認 為bim技術(shù)不過就是一個碰撞檢測軟件。這是一個很大的誤解，bim 技術(shù)實質(zhì)上是一個軟件體系，可以把bim應(yīng)用軟件劃分為從建模軟件 到運維軟件的九大類別，這九類軟件分別對應(yīng)著bim不同的應(yīng)用階 段，每類軟件都有幾種到幾種到幾十種不同國家、不同公司開發(fā)的應(yīng) 用軟件，它們互相競爭又互相補充。 關(guān)鍵詞：bim技術(shù)；精細化模型；軟件體系 establishacompleteconceptofbimsoftwaresystems abstract：nowadays,theapplicationofbimtechnologyindomestic constructionprojectshasb

多年的旱柳小老樹因干旱、病蟲害等原因影響,出現(xiàn)枯梢和死亡.經(jīng)過截頭改造復(fù)壯處理來恢復(fù)生機和提高林分質(zhì)量和利用價值.

運用單因素試驗法對影響也門鐵issr-pcr擴增的各個因素進行了優(yōu)化,優(yōu)化體系為:25μl反應(yīng)體系中,taq酶濃度0.04u.μl-1、dntps濃度0.18mmol.l-1、引物濃度0.4μmol.l-1、mg2+濃度2.0mmol.l-1、模板濃度0.8ng.μl-1、甲酰胺濃度1.6%、1×buffer,最后用ddh2o補足到25μl。利用優(yōu)化體系和篩選的引物對也門鐵及其嵌合體品種進行了issr擴增分析。

利用正交設(shè)計試驗,對影響issr-pcr的mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶和模板dna5個因素進行優(yōu)化試驗。結(jié)果表明:25μlissr-pcr反應(yīng)體系中各因素的最佳條件為mg2+2.5mmol/l、dntps0.25mmol/l、引物0.2μmol/l、taqdna聚合酶1.0u,模板dna40ng。通過對狗牙根issr-pcr最佳反應(yīng)體系進行梯度退火試驗,得到引物ubc881的最佳退火溫度為50.5℃。該體系在24個狗牙根種質(zhì)中獲得較好的擴增結(jié)果,該優(yōu)化體系為今后利用issr技術(shù)進行狗牙根屬種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

采用單因子試驗和正交試驗設(shè)計,對影響海南龍血樹rapd-pcr反應(yīng)的模板dna量、mg2+、dntp和引物濃度,taq聚合酶用量等因子進行研究,分析各因子對rapd-pcr擴增結(jié)果的影響,確立了海南龍血樹rapd-pcr反應(yīng)的最佳條件,即在25μl反應(yīng)體系中,包含10×buffer2.5μl,2.0mmol/lmgcl2,300μmol/ldntps,taq酶1.5u,引物0.8μmol/l和dna模板20ng。以此條件為基礎(chǔ),篩選出適用于海南龍血樹rapd-pcr分析的18條有效引物,為采用rapd技術(shù)分析海南龍血樹種群遺傳變異水平和遺傳結(jié)構(gòu)打下了基礎(chǔ)。

為了建立并優(yōu)化大青葉srap-pcr擴增體系。以大青葉基因組dna為模板,通過正交試驗設(shè)計,從mg2+、dntp、引物、taqdna聚合酶和模板dna5種因素5個水平對大青葉srap-pcr反應(yīng)體系進行優(yōu)化。建立的大青葉srap-pcr最佳反應(yīng)體系為25μl反應(yīng)體系中含1.5mmol·l-1mg2+、0.15mmol·l-1dntps、0.60μmol·l-1引物、2.0utaqdna聚合酶和26ngdna模板。在這一體系下對不同大青葉材料的pcr擴增和在不同引物組合下擴增都證明該體系穩(wěn)定可靠適合于大青葉srap分子標記。這一體系的建立為今后利用srappcr分子標記技術(shù)開展大青葉分子遺傳學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。

[目的]建立貫葉連翹的issr-pcr反應(yīng)體系,并對其條件進行優(yōu)化。[方法]以貫葉連翹基因組dna為模板,用l16(45)正交試驗設(shè)計系統(tǒng)分析引物濃度、taqdna聚合酶濃度、mg2+濃度、dntp濃度和模板dna濃度5種因素對貫葉連翹issr-pcr反應(yīng)擴增結(jié)果的影響。[結(jié)果]正交試驗設(shè)計的方法可以用于貫葉連翹issr-pcr反應(yīng)體系的建立,經(jīng)過優(yōu)化得到貫葉連翹issr-pcr反應(yīng)體系的最佳條件為:20μlissr-pcr反應(yīng)體系中含10×pcrbuffer,mg2+濃度1.2mmol/l,taqdna聚合酶濃度50u/ml,dna濃度20ng/μl,dntp濃度250μmol/l,引物濃度0.75μmol/l。[結(jié)論]試驗建立的貫葉連翹的issr-pcr反應(yīng)體系重復(fù)性好、分辨率高,結(jié)果穩(wěn)定可靠。

【目的】優(yōu)化大旗瓣鳳仙issr-pcr反應(yīng)體系,為大旗瓣鳳仙遺傳多樣性分析提供技術(shù)參考。【方法】利用正交試驗設(shè)計對大旗瓣鳳仙issr-pcr反應(yīng)體系的5個因素(mg2+、dntp、引物、taqdna聚合酶、模板dna)4水平進行優(yōu)化分析,并在此基礎(chǔ)上對pcr反應(yīng)過程中的退火溫度進行篩選?！窘Y(jié)果】建立了大旗瓣鳳仙issr-pcr的優(yōu)化反應(yīng)體系,即在25.0μl反應(yīng)體系中含1×pcrbuffer、mg2+1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.8μmol/l、taqdna聚合酶0.75~1.00u、模板dna100ng。通過該體系可以篩選出6條對大旗瓣鳳仙種群擴增效果較好的引物?！窘Y(jié)論】優(yōu)化的issr-pcr反應(yīng)體系具有較高的穩(wěn)定性,可用于大旗瓣鳳仙及鳳仙屬植物種群的issr遺傳多樣性分析。

為使礦井通風(fēng)系統(tǒng)安全、高效、經(jīng)濟運行,通過現(xiàn)場測試獲取通風(fēng)系統(tǒng)參數(shù),依據(jù)國家相關(guān)標準,采用文獻沉淀法沉淀出858個指標,通過指標新增、刪除、合并,建立包含20個指標的初步指標體系。對初步指標體系中的指標進行相關(guān)性分析,得出kmo大于0.7且bartlett球形檢驗值小于0.001,指標信息具有重疊現(xiàn)象。使用因子分析法對初步指標體系進行指標約簡,從5個方面確立了由16個指標組成的礦井通風(fēng)系統(tǒng)指標體系,其中包括礦井風(fēng)阻標準度和風(fēng)機運轉(zhuǎn)穩(wěn)定性系數(shù)2個新增指標,并首次定量給出了通風(fēng)系統(tǒng)三區(qū)阻力分布合理度和風(fēng)機運行合理度計算公式。

礦井排水系統(tǒng)是煤礦安全生產(chǎn)的必備環(huán)節(jié).通過對礦井排水系統(tǒng)現(xiàn)有規(guī)程、規(guī)范的理解和分析,指出礦井排水系統(tǒng)現(xiàn)有規(guī)程、規(guī)范中存在的問題.結(jié)合開灤地區(qū)礦井的實際情況,對目前礦井,特別是水文地質(zhì)條件復(fù)雜的礦井,正常排水系統(tǒng)和強排水系統(tǒng)中存在的問題進行了分析探討,提出了相應(yīng)解決方法.通過分析比較,并結(jié)合礦井實際和多年排水系統(tǒng)設(shè)計經(jīng)驗,提出了利用潛水泵排水系統(tǒng)作為礦井排水系統(tǒng)的設(shè)計理念.