氨基酸等電點氨基酸等電點

isoeletric point ，pI 定義：

2、氨基酸凈電荷為零時的pH值。

3、氨基酸是兩性電解質，在堿性溶液中表現出帶負電荷，在酸性溶液中表現出帶正電荷，在某一定pH溶液中，氨基酸所帶的正電荷和負電荷相等時的pH,稱為該氨基酸的等電點。

1、對于側鏈R基不解離的中性氨基酸來說，pI=1/2（pK_a1 PK_a2）。

2、對于有多個解離基團的氨基酸來說，只要寫出它的解離公式，然后取等電兼性離子兩邊的pK_a的平均值則得出其pI值。

注：pI值與該離子濃度基本無關，只取決于等電中性離子A⁰兩側的pK值。

1、氨基酸的甲醛滴定（formal titration）

氨基酸等電點原理

氨基酸雖然是一種兩性電解質，即是酸性又是堿性，但它卻不能直接用酸堿滴定來進行測量。這是因為氨基酸的酸堿滴定的等電點pH過高（12-13）或是過低（1-2）沒有適合的指示劑可備選用。而向氨基酸中加入過量的甲醛，用氫氧化鈉滴定時，由于甲醛可與氨基酸上的—N H₃結合，形成—NH—CH₂OH、—N(CH₂—OH)₂等羥甲基衍生物，而降低了氨基酸的堿性，相對增強了—N H₃的解離，使滴定終點移到了pH9附近，在酚酞指示劑的變色區(qū)域內，能夠用酚酞作為指示劑進行滴定。

以上出自《生物化學》（高等教育出版社 2006.5，王鏡巖等主編）

氨基酸等電點流程

甲醛滴定法測定氨基酸含量

目的

初步掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點

原理

水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N H₃結合，形成—NH—CH₂OH、—N(CH₂—OH)₂ 等羥甲基衍生物，使N H₃上的H 游離出來，這樣就可以用堿滴定N H₃放出H ，測出氨基氮，從而計算氨基酸的含量。

若樣品中只含有單一的已知氨基酸，則可由此法滴定的結果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸（如蛋白質水解液），測不能由此法算出氨基酸的含量。

脯氨酸與甲醛作用后，生成的化合物不穩(wěn)定，導致滴定后結果偏低；酪氨酸含酚基結構，導致滴定結果偏高。

材料、試劑與器具

（一）試劑

1、0.5%酚酞酒精溶液

稱0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。

2、0.05%溴麝香草酚藍溶液

取0.05溴麝行草酚藍溶于100ml 20%乙醇溶液中。

3、1%甘氨酸溶液

取1g甘氨酸溶于100ml蒸餾水。

4、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液

5、中性甲本醛溶液

取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示劑約3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。

（二）實驗器具

1、錐形瓶 2、堿式滴定管

3、 移液管洗耳球 4、天平

5、容量瓶 6、試劑瓶

7、量筒 8、玻棒與燒杯

氨基酸等電點操作步驟

1、取3只100ml錐形瓶，按下表加入試劑

2、混勻后用標準0.100mol/L氫氧化鈉溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）

3、結果計算

每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克數為

式中：V₁為滴定樣品消耗氫氧化鈉的體積（ml）；

V₂為滴空白消耗氫氧化鈉的體積（ml）；

1.4008 為1ml 0.1mol/L氫氧化溶液相當的氮量（mg）

氨基酸等電點注意事項

利用甲醛滴淀法可以用來測定蛋白質的水解程度。隨著蛋白質水解度的增加，滴定值也增加，當蛋白質水解完成后，滴定值不再增加。

甘氨酸5.97

丙氨酸6.00

纈氨酸5.96

亮氨酸5.98

異亮氨酸6.02

苯丙氨酸5.48

絲氨酸5.68

蘇氨酸6.16

酪氨酸5.66

半胱氨酸5.05

蛋氨酸5.74

脯氨酸6.30

色氨酸5.89

賴氨酸9.74

精氨酸10.76

組氨酸7.59

天冬氨酸2.77

谷氨酸3.22

天冬酰胺5.41

谷氨酰胺5.65

出自《有機化學》（高等教育出版社 2004.11，曾昭瓊主編）