冷凍保護(hù)劑

滲透性冷凍保護(hù)劑多是一些小分子物質(zhì)，可以透過(guò)細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi)。

滲透性冷凍保護(hù)劑主要包括二甲基亞砜、甘油、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。其保護(hù)機(jī)制是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前，滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷同時(shí)。細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮。

在使用滲透性冷凍保護(hù)劑時(shí)，需要一定時(shí)間進(jìn)行預(yù)冷，在細(xì)胞內(nèi)外達(dá)到平衡以起到充分的保護(hù)作用。

目前使用較多的是二甲基亞砜、甘油、乙二醇和丙二醇等。

非滲透性冷凍保護(hù)劑一般是些大分子物質(zhì)，不能滲透到細(xì)胞內(nèi)。

非滲透性冷保護(hù)劑主要包括聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白及羥乙基淀粉等。

保護(hù)機(jī)制的假設(shè)很多，其中一種可能是聚乙烯吡咯烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中的水分子相結(jié)合，降低溶液中自由水的含量，使冰點(diǎn)降低，減少冰晶的形成;同時(shí)，由于其分子量大，使溶液中電解質(zhì)濃度降低，從而減輕溶質(zhì)損傷。

?凍存保護(hù)劑是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)(常為溶液)。

細(xì)胞懸液中加入冷凍保護(hù)劑可保護(hù)細(xì)胞免受溶液損傷和冰晶損傷。冷凍保護(hù)劑同溶液中的水分子結(jié)合，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過(guò)程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成，同時(shí)冷凍保護(hù)劑可以通過(guò)在細(xì)胞內(nèi)外維持一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細(xì)胞免受溶質(zhì)的損傷。

冷凍保護(hù)劑根據(jù)其是否穿透細(xì)胞膜可分為滲透性和非滲透性兩類。

冰晶損傷:因細(xì)胞內(nèi)部結(jié)冰而導(dǎo)致的細(xì)胞損傷;

溶液損傷:因保存溶液中溶質(zhì)濃度升高而導(dǎo)致的細(xì)胞損傷;

滲透性冷凍保護(hù)劑:可以滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是一些小分子物質(zhì)，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等;

非滲透性冷凍保護(hù)劑:不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是寫大分子物質(zhì)，主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羥乙基淀粉等。