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生物大分子的液_固色譜純化過程中固相載體會產生產物吸附、變性等不良影響。高速逆流色譜無需固相載體 ,且具有高分便率和高回收率的優(yōu)點 ,其中有機相 水相體系在分離天然產物中應用廣泛 ,而應用雙水相體系分離生物大分子尚處于研究階段。雙水相高速逆流色譜體系的建立與儀器設備及操作工藝條件密切相關 ,因此利用多分離柱高速逆流色譜儀 ,研究了PEG10 0 0_無機鹽雙水相體系對標準蛋白質混合物以及卵白蛋白的分離。pH值和PEG濃度對不同種類蛋白質的分配系數影響不同 ,實驗發(fā)現在pH9 2的 15 0 % (W W)PEG10 0 0 17 0 % (W W)磷酸鉀鹽體系中 ,細胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白的分配系數差異較大 ,且分布合理 ,因而采用該體系在 0 8mL min流速 ,85 0r min轉速的條件下 ,成功分離了細胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白的混合物。實驗也發(fā)現在pH9 2的 16 0 % (W W)PEG10 0 0 17 0 % (W W)磷酸鉀鹽體系中 ,雞蛋清樣品中的主要蛋白質成分 :卵轉鐵蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系數差異最大 ,因而采用該體系在 1 8mL min流速、85 0r min轉速的條件下 ,2 0 0min內從雞蛋清樣品中成功分離卵白蛋白 ,其電泳純度為 10 0 % ,收率為 95 %。
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