毛細(xì)管區(qū)帶電泳法

毛細(xì)管區(qū)帶電泳法

【所用設(shè)備】主要部件有0~30kV可調(diào)穩(wěn)壓穩(wěn)流電源，內(nèi)徑小于100μm(常用50~75μm)、長度一般為30~100cm的彈性石英毛細(xì)管、電極槽、檢測器和進(jìn)樣裝置。檢測器有紫外/可見分光檢測器、激光誘導(dǎo)熒光檢測器和電化學(xué)檢測器，前者最為常用。進(jìn)樣方法有電動法(電遷移)、壓力法(正壓力、負(fù)壓力)和虹吸法。成套儀器還配有自動沖洗、自動進(jìn)樣、溫度控制、數(shù)據(jù)采集和處理等部件。毛細(xì)管電泳所用的石英毛細(xì)管柱，在pH值>3的情況下，其內(nèi)表面帶負(fù)電，與緩沖液接觸時形成雙電層，在高壓電場作用下，形成雙電層一側(cè)的緩沖液由于帶正電而向負(fù)極方向移動，從而形成電滲流。同時，在緩沖溶液中，帶電粒子在電場作用下，以各自不同速度向其所帶電荷極性相反方向移動，形成電泳。帶電粒子在毛細(xì)管緩沖液中的遷移速度等于電泳和電滲流的矢量和。各種粒子由于所帶電荷多少、質(zhì)量、體積以及形狀不同等因素引起遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分離。

目前，毛細(xì)管電泳的分離模式有以下幾種。

(1)毛細(xì)管區(qū)帶電泳，用以分析帶電溶質(zhì)。為了降低電滲流和吸附現(xiàn)象，可將毛細(xì)管內(nèi)壁涂層。

(2)毛細(xì)管凝膠電泳，在毛細(xì)管中裝入單體，引發(fā)聚合形成凝膠，主要用于測定蛋白質(zhì)、DNA等大分子化合物。另有將聚合物溶液等具有篩分作用的物質(zhì)，如葡聚糖、聚環(huán)氧乙烷，裝人毛細(xì)管中進(jìn)行分析，稱毛細(xì)管無膠篩分電泳，故有時將此種模式總稱為毛細(xì)管篩分電泳，下分為凝膠和無膠篩分兩類。

(3)膠束電動毛細(xì)管色譜，在緩沖液中加入離子型表面活性劑如十二烷基硫酸鈉，形成膠束，被分離物質(zhì)在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)之間發(fā)生分配并隨電滲流在毛細(xì)管內(nèi)遷移，達(dá)到分離。本模式能用于中性物質(zhì)的分離。

(4)親和毛細(xì)管電泳，在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布或在凝膠中加入親和配基，以親和力的不同達(dá)到分離目的。

(5)毛細(xì)管電色譜，是將HPLC的固定相填充到毛細(xì)管中或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布固定相，以電滲流為流動相驅(qū)動力的色譜過程，此模式兼具電泳和液相色譜的分離機(jī)制。

(6)毛細(xì)管等電聚焦電泳，是通過內(nèi)壁涂層使電滲流減到最小，再將樣品和兩性電解質(zhì)混合進(jìn)樣，兩個電極槽中分別為酸和堿，加高電壓后，在毛細(xì)管內(nèi)建立了pH梯度，溶質(zhì)在毛細(xì)管中遷移至各自的等電點(diǎn)，形成明顯區(qū)帶，聚焦后用壓力或改變檢測器末端電極槽儲液的pH值使溶質(zhì)通過檢測器。

(7)毛細(xì)管等速電泳，采用先導(dǎo)電解質(zhì)和后繼電解質(zhì)，使溶質(zhì)按其電泳倘度不同得以分離。

以上各模式以(1)、(2)、(3)種應(yīng)用較多。電極槽和毛細(xì)管內(nèi)的溶液為緩沖液，可以加入有機(jī)溶劑作為改性劑，以及加入表面活性劑，稱作運(yùn)行緩沖液。運(yùn)行緩沖液使用前應(yīng)脫氣。電泳譜中各成分的出峰時間稱遷移時間。膠束電動毛細(xì)管色譜中的膠束相當(dāng)于液相色譜的固定相，但它在毛細(xì)管內(nèi)隨電滲流遷移，故容量因子為無窮大的成分最終也隨膠束流出。

其他各種參數(shù)都與液相色譜所用的相同。

一、對儀器的一般要求所用的儀器為毛細(xì)管電泳儀。正文中凡采用毛細(xì)管電泳法測定的品種，其所規(guī)定的測定參數(shù)，除分析模式、檢測方法(如紫外光吸收或熒光檢測器的波長、電化學(xué)檢測器的印加電位等)應(yīng)按照該品種項(xiàng)下的規(guī)定外，其他參數(shù)如毛細(xì)管內(nèi)徑、長度、緩沖液的pH值、濃度、改性劑添加量、運(yùn)行電壓或電流的大小、運(yùn)行的時間長短、毛細(xì)管的溫度等，均可參考該品種項(xiàng)下規(guī)定的數(shù)據(jù)，根據(jù)所用儀器的條件和預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，進(jìn)行必要的調(diào)整。

二、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同高效液相色譜法項(xiàng)下，按各品種項(xiàng)下的要求，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，并調(diào)節(jié)各運(yùn)行參數(shù)使達(dá)到規(guī)定指標(biāo)，方可正式測定。

三、測定法同高效液相色譜法項(xiàng)下。目前毛細(xì)管電泳儀的進(jìn)樣精度較高效液相色譜法低，定量分析時以用內(nèi)標(biāo)法為宜。