索氏抽提法

測(cè)定用樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都需要進(jìn)行脫水處理。

試樣粗細(xì)度要適宜。

索氏抽提法測(cè)定脂肪最大的不足是耗時(shí)過長(zhǎng)，如能將樣品先回流1~2次，然后浸泡在溶劑中過夜，次日再繼續(xù)抽提，則可明顯縮短抽提時(shí)間。

YG-Ⅱ型油分測(cè)定器容量大，適合于樣品較多的選種鑒定工作使用，溫度控制在70℃左右，8h可提取完畢。

必須十分注意乙醚的安全使用。

乙醚中過氧化物的檢查方法是:取適量乙醚，加入碘化鉀溶液，用力搖動(dòng)，放置1min，若出現(xiàn)黃色則表明存在過氧化物，應(yīng)進(jìn)行處理后方可使用。處理的方法是:將乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗滌2~3次，以除去乙醇;然后用鹽酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振搖，靜置，分層后棄去下層水溶液，以除去過氧化物;最后用水洗至中性，用無水CaCl2或無水Na2SO4脫水，并進(jìn)行重蒸餾。

如何利用殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量?

殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量，是用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑(乙醚或石油醚)回流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘?jiān)亓恐?，來?jì)算粗脂肪含量。

測(cè)定過程中為什么需要對(duì)樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都要進(jìn)行脫水處理?

進(jìn)行脫水處理的原因有三:第一，抽提體系中有水，會(huì)使樣品中的水溶性物質(zhì)溶出，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高;第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和(尤其是乙醚，可飽和約2%的水)，從而影響抽提效率;第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細(xì)胞組織內(nèi)部，結(jié)果不易將脂肪抽提干凈。

在實(shí)驗(yàn)過程中安全使用乙醚應(yīng)注意哪些問題?

抽提室內(nèi)嚴(yán)禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過氧化物，保持抽提室內(nèi)良好通風(fēng)，以防燃爆。

測(cè)定樣品粒子粗細(xì)有什么要求?

試樣粗細(xì)度要適宜。試樣粉末過粗，脂肪不易抽提干凈;試樣粉末過細(xì)，則有可能透過濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測(cè)定結(jié)果。

采用索氏抽提法中的殘余法，即用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑(乙醚或石油醚)回流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘?jiān)亓恐睿?jì)算粗脂肪含量。由于有機(jī)溶劑的抽提物中除脂肪外，還或多或少含有游離脂肪酸、甾醇、磷脂、蠟及色素等類脂物質(zhì)，因而抽提法測(cè)定的結(jié)果只能是粗脂肪。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

油料作物種子、中速濾紙

(1)索氏脂肪抽提器(圖1)或YG-Ⅱ型油分測(cè)定器

(2)干燥器(直徑15~18cm，盛變色硅膠)

(3)不銹鋼鑷子(長(zhǎng)20cm)

(4)培養(yǎng)皿

(5)分析天平(感量0.001g)

(6)稱量瓶

(7)恒溫水浴

(8)烘箱

(9)樣品篩(60目)

無水乙醚或低沸點(diǎn)石油醚(A.R.)

切片

將濾紙切成8cm×8cm，疊成一邊不封口的紙包，用硬鉛筆編寫順序號(hào)，按順序排列在培養(yǎng)皿中。將盛有濾紙包的培養(yǎng)皿移入105±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷卻至室溫。按順序?qū)⒏鳛V紙包放人同一稱量瓶中稱重(記作a)、稱量時(shí)室內(nèi)相對(duì)濕度必須低于70%。

包裝干燥

在上述已稱重的濾紙包中裝入3g左右研細(xì)的樣品，封好包口，放入105±2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷卻至室溫。按順序號(hào)依次放入稱量瓶中稱重(記作b)。

抽提

將裝有樣品的濾紙包用長(zhǎng)鑷子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67倍的無水乙醚，使樣品包完全浸沒在乙醚中。連接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒溫水浴中進(jìn)行抽提，調(diào)節(jié)水溫在70~80℃之間，使冷凝下滴的乙醚成連珠狀(120~150滴/min或回流7次/h以上)，抽提至抽取筒內(nèi)的乙醚用濾紙點(diǎn)滴檢查無油跡為止(約需6~12h)。抽提完畢后，用長(zhǎng)鑷子取出濾紙包，在通風(fēng)處使乙醚揮發(fā)(抽提室溫以12~25℃為宜)。提取瓶中的乙醚另行回收。

稱重

待乙醚揮發(fā)之后，將濾紙包置于105±2℃烘箱中干燥2h，放入干燥器冷卻至恒重為止(記作c)。

粗脂肪含量(%)=( b-c)/(b-a) ×100

式中:a:稱量瓶加濾紙包重(g)

b:稱量瓶加濾紙包和烘干樣重(g)

c:稱量瓶加濾紙包和抽提后烘干殘?jiān)?g)

測(cè)定用樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都需要進(jìn)行脫水處理。

這是因?yàn)?第一，抽提體系中有水，會(huì)使樣品中的水溶性物質(zhì)溶出，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高;第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和(尤其是乙醚，可飽和約2%的水)，從而影響抽提效率;第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細(xì)胞組織內(nèi)部，結(jié)果不易將脂肪抽提干凈。

試樣粗細(xì)度要適宜。

試樣粉末過粗，脂肪不易抽提干凈;試樣粉末過細(xì)，則有可能透過濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測(cè)定結(jié)果。

索氏抽提法測(cè)定脂肪最大的不足是耗時(shí)過長(zhǎng)，如能將樣品先回流1~2次，然后浸泡在溶劑中過夜，次日再繼續(xù)抽提，則可明顯縮短抽提時(shí)間。

YG-Ⅱ型油分測(cè)定器容量大，適合于樣品較多的選種鑒定工作使用，溫度控制在70℃左右，8h可提取完畢。

必須十分注意乙醚的安全使用。

抽提室內(nèi)嚴(yán)禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過氧化物，保持抽提室內(nèi)良好通風(fēng)，以防燃爆。乙醚中過氧化物的檢查方法是:取適量乙醚，加入碘化鉀溶液，用力搖動(dòng)，放置1min，若出現(xiàn)黃色則表明存在過氧化物，應(yīng)進(jìn)行處理后方可使用。處理的方法是:將乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗滌2~3次，以除去乙醇;然后用鹽酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振搖，靜置，分層后棄去下層水溶液，以除去過氧化物;最后用水洗至中性，用無水CaCl2或無水Na2SO4脫水，并進(jìn)行重蒸餾。