微電泳法使用器材方法

五、或七管微電極，一般每管尖端直徑約1μm，七管總直徑5-8μm.。若充灌的 是小分子物質(zhì)，如NMDA、Glu等，則每管尖端直徑可以是0.5μm, 七管總和為3-4μm，這樣可使記錄管電阻高達(dá)5MΩ-10MΩ，周邊管達(dá)40MΩ-100MΩ，不僅能滿足電泳要求，還能記錄到較大的電位。若充灌的是大分子肽類，則直徑要大一些，一般不能超過10μm，否則易致泄漏，且電痊記錄過小。但本法雖然解離量與電流成正比，但不同的微電極或不同的物質(zhì)的實(shí)際釋出量有很大差異，且無(wú)規(guī)律可循。應(yīng)將微電泳與整體功能結(jié)合起來(lái)，才能得出正確的結(jié)論。

微電極充灌一般多為較高濃度的NaCl (4mol)或KCl (3mol)以使電極尖端獲得高離子濃度，從而得到低阻抗微電極。其中一個(gè)周邊管充以150mmol/L NaCl作平衡電流用，其余根據(jù)需要充不同灌注液。充灌方法有許多種，壓力法，充灌注，真空法，酒精法等，最常用的是玻璃纖維法。

(1)濃度:增加傳導(dǎo)性并減少噪聲，可用較高濃度的溶液，以使所要電泳的離子具有較高的濃度和穩(wěn)定形式一般微電泳溶液濃度為5-500mmol/L不必過大。對(duì)于效能很強(qiáng)的化學(xué)物質(zhì)，可用150mmol/L的NaCl作為溶劑，溶液濃度盡量低，以防止因藥物擴(kuò)散引起的生物學(xué)效應(yīng)。

(2)pH值:常用低濃度(0.1N)鹽酸或NaOH將溶劑調(diào)整到適當(dāng)?shù)膒H值，以增加溶質(zhì)的溶解度和穩(wěn)定度。但有些物質(zhì)，如中性氨基酸難以離子化。此時(shí)可參考其pKa值調(diào)整，使pH=pKa-1，這可使90%氨基酸離子化。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般pH為3.5-4.0。完全不能離了化物質(zhì)可用微壓力法注射。另外，充灌注一定要干凈，避免污染。

(3)防止藥物漏出，可通過持續(xù)施加一個(gè)帶極性的"遲滯電流"來(lái)防止。遲滯電流的極性方向與所要電泳的離子所帶電荷相反，這樣使得所要電泳的離子向回移動(dòng)(對(duì)抗漏出)，從而使尖端離子濃度降低，一般電流大小應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況具體調(diào)整，一般為10-30nA。有些效能很強(qiáng)的物質(zhì)則需施加較大的遲滯電流。

(4)注射電流。其大小和持續(xù)時(shí)間以能產(chǎn)生預(yù)期的生物學(xué)效應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)。注射電流的極性方向與遲滯電流方向相反，即和甩要電泳的離子所帶電荷相同。

一般大多微電泳儀均能進(jìn)行自動(dòng)電流平衡，一般不會(huì)產(chǎn)生偽跡，但手工操作時(shí)應(yīng)注意。

如果所要電泳的藥物的溶解度和離子化程度低，則其傳導(dǎo)性也低，而傳導(dǎo)性越低，就越易產(chǎn)生較高的電噪聲。

在較高電噪聲下，即使維持穩(wěn)定的注射電流，但其對(duì)離子的泳出率也往往大大偏離理論值，可采用下列方法克服:盡可能選用尖端大的電極，可達(dá)10μm左右;將該物質(zhì)充灌于周邊多個(gè)周邊管中，實(shí)施電泳時(shí)分別是以較小的注射電流同時(shí)從幾個(gè)管內(nèi)將藥物排 出，這樣可減少噪聲，如果所要電泳的藥物的溶解度和離子化程度較高，則噪聲一般不成問題。

許多情況下，電泳某藥物觀察其生物學(xué)效應(yīng)時(shí)需要重復(fù)幾次并且給一個(gè)固定劑量。

由于遲滯電流的存在，使得電極尖端的藥物濃度降低，所以一開始后的即早期，所排出的藥物較少，隨后逐漸上升至一個(gè)平臺(tái)。這取決于注射電流的大小和開始電泳時(shí)電極尖端離子濃度的高低。

因此重復(fù)給藥時(shí)，應(yīng)該以固定程序進(jìn)行:固定大小的注射電流、固定的注射時(shí)間(應(yīng)足以使藥物釋出和反應(yīng)達(dá)到平臺(tái)值)、固定間隔時(shí)間等，達(dá)到相對(duì)定量的目的。