紙層析法

在環(huán)境分析測試中，有時用紙層析法分離試樣組分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC應(yīng)用普遍。在做葉綠體色素分離時用到,將葉片碾碎，浸出綠色液體，將液體與層析液(石油醚)混合，將濾紙一段進(jìn)入混合液體，四種色素在層析液中的溶解度不同，在濾紙上留下4條色素帶。由此觀查出各種色素的相對含量和種類。

紙層析法一般用于葉綠體中色素的分離，葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、 葉綠素a、葉綠素b，它們在層析液中的溶解度不同，溶解度大的隨層析液在濾

紙上擴(kuò)散地快，反之則慢;含量較多者色素帶也較寬。最后在濾紙上留下4條色素帶，所以利用紙層析法

能清楚地將葉綠體中的色素分離。

紙層析法中所用的有機(jī)溶劑如丙酮等，一般有揮發(fā)性、并有一定毒性，使用時要注意密封層析，避免吸入過多有害揮發(fā)物。

以紙為載體的色譜法。固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為不與水相溶的有機(jī)溶劑;也可使紙吸留其他物質(zhì)作為固定相，如緩沖液，甲酰胺等。將試樣點(diǎn)在紙條的一端，然后在密閉的槽中用適宜溶劑進(jìn)行展開。當(dāng)組分移動一定距離后，各組分移動距離不同，最后形成互相分離的斑點(diǎn)。將紙取出，待溶劑揮發(fā)后，用顯色劑或其他適宜方法確定斑點(diǎn)位置。根據(jù)組分移動距離(Rf值)與已知樣比較，進(jìn)行定性。用斑點(diǎn)掃描儀或?qū)⒔M分點(diǎn)取下，以溶劑溶出組分，用適宜方法定量(如光度法、比色法等)。

通?？捎糜谌~綠素的色素成分檢驗(yàn)，氨基酸的鑒定及測定，橘皮精油成分檢驗(yàn)及一些特定細(xì)胞篩查等實(shí)驗(yàn)。

紙層析法依據(jù)極性相似相溶原理，是以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，而以有機(jī)溶劑作為流動相。由于樣品中各物質(zhì)分配系數(shù)不同，因而擴(kuò)散速度不同，從而達(dá)到分離的目的。

試樣經(jīng)層析后可用比移值(Rf)表示各組成成分的位置(比移值=原點(diǎn)中心至色譜斑點(diǎn)中心的距離與原點(diǎn)中心至流動相前沿的距離之比)，由于影響比移值的因素較多，因此一般采用在相同實(shí)驗(yàn)條件下對照物質(zhì)對比以確定其異同。作為單體鑒別時，試樣所顯主色譜斑點(diǎn)的顏色(或熒光)與供置，應(yīng)與對照(標(biāo)準(zhǔn))樣所顯主色的譜斑點(diǎn)或供試品-對照品(1∶1)混合所顯的主色譜斑點(diǎn)相同。作為質(zhì)量指標(biāo)(純度)檢查時，可取一定量的試樣，經(jīng)展開后，按各單體的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)色譜斑點(diǎn)的個數(shù)或呈色(或熒光)的強(qiáng)度。作為含量測定時，可將色譜斑點(diǎn)剪下洗脫后，再用適宜的方法測定，也可用色譜掃描儀測定。

紙層析是以濾紙為惰性支持物。濾紙纖維和水有較強(qiáng)的親和力，能吸收22%左右的水，而且其中6~7%的水是以氫鍵形式與纖維素的羥基結(jié)合，在一般條件下較難脫去，而濾紙纖維與有機(jī)溶劑的親和力甚弱，所以一般的紙層析實(shí)際上是以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，以有機(jī)溶劑為流動相，當(dāng)流動相沿紙經(jīng)過樣品時，樣品點(diǎn)上的溶質(zhì)在水和有機(jī)相之間不斷進(jìn)行分配，一部分樣品隨流動相移動，進(jìn)入無溶質(zhì)區(qū)，此時又重新分配，一部分溶質(zhì)由流動相進(jìn)入固定相(水相)。隨著流動相的不斷移動，各種不同的部分按其各自的分配系數(shù)不斷進(jìn)行分配，并沿著流動相移動，從而使物質(zhì)得到分離和提純。

濾紙(Filter Paper)是一種常見于化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的過濾工具，常見的形狀是圓形，多由棉質(zhì)纖維制成。

薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點(diǎn)與柱層析的比較。