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更新時間：2025.05.31
差異檸檬酸桿菌GXW-1 β-葡萄糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)及分子改造

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【目的】篩選鑒定1株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表達(dá)該菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重組酶的酶學(xué)性質(zhì)并進(jìn)行分子改造。【方法】在自然界中采集土樣,篩選到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,對野生菌進(jìn)行16S rDNA鑒定,比對分析Gen Bank數(shù)據(jù)庫中與野生菌同屬的β-葡萄糖苷酶基因序列,設(shè)計簡并引物PCR擴(kuò)增基因保守區(qū);設(shè)計引物擴(kuò)增目的基因,以pQE30為表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá);采用鎳親和層析對重組酶進(jìn)行純化,研究其酶學(xué)性質(zhì);采用易錯PCR和定點(diǎn)隨機(jī)突變相結(jié)合的方法對野生型β-葡萄糖苷酶進(jìn)行分子改造。【結(jié)果】一個來自于差異檸檬酸桿菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大腸桿菌中表達(dá)。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明該β-葡萄糖苷酶CBGL的最適溫度為45°C,最適p H為6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值為(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。對野生酶進(jìn)行分子改造,獲得V_(max)是野生酶2.54倍的突變體W147F。【結(jié)論】CBGL不僅具有β-1,4-糖苷鍵水解能力,還可能具有一定的α-糖苷鍵水解酶活性。此外,CBGL還能夠水解天然底物甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。這些特性表明該β-葡萄糖苷酶在理論研究及在工業(yè)中有一定的應(yīng)用價值。

玻璃球負(fù)載納米級SO_4~(2-)/TiO_2固體超強(qiáng)酸催化合成丙酸芐酯

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用玻璃球負(fù)載納米級SO42-/TiO2固體超強(qiáng)酸催化合成丙酸芐酯,對丙酸芐酯的合成條件和催化劑的重復(fù)使用效果進(jìn)行了研究。在最佳反應(yīng)條件下,丙酸的轉(zhuǎn)化率為97.5%。實(shí)驗(yàn)還表明,該催化劑對丙酸和芐醇的酯化反應(yīng)在重復(fù)使用5次后,反應(yīng)3.0 h時丙酸的轉(zhuǎn)化率變?yōu)?0.3%,催化產(chǎn)物的氣相色譜說明該催化劑選擇性好,無副產(chǎn)物生成,是合成丙酸芐酯的良好催化劑,具有較好的應(yīng)用前景。

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