UV分光光度計(jì)uv分光光度計(jì)的原理

紫外可見吸收光譜的基本原理是利用在光的照射下待測樣品內(nèi) 部的電子躍遷，電子躍遷類型有: (1)σ→σ* 躍遷 指處于成鍵軌道上的 σ 電子吸收光子后被激發(fā)躍遷到 σ* 反鍵軌道 (2)n→σ* 躍遷 指分子中處于非鍵軌道上的 n 電子吸收能量后向 σ*反鍵軌 道的躍遷 (3)π→π* 躍遷 指不飽和鍵中的 π 電子吸收光波能量后躍遷到 π*反鍵軌 道。 (4)n→π* 躍遷 指分子中處于非鍵軌道上的 n 電子吸收能量后向 π*反鍵軌 道的躍遷 。 電子躍遷類型不同，實(shí)際躍遷需要的能量不同: σ→σ* ~150nm n→σ* ~200nm π→π* ~200nm n→π* ~300nm 吸收能量的次序?yàn)?σ→σ*>n→σ*≥π→π*>n→π* 特殊的結(jié)構(gòu)就會(huì)有特殊的電子躍遷，對(duì)應(yīng)著不同的能量(波長)，反反映在紫 外可見吸收光譜圖上就有一定位置一定強(qiáng)度的吸收峰，根據(jù)吸收峰的位置和強(qiáng)度就可 以推知待測樣品的結(jié)構(gòu)信息。

1.接通電源; 開電腦主機(jī); 2.進(jìn)入控制軟件界面; 3. 選擇所用程序( scan掃描為例 掃描為例) 4. 設(shè)置儀器參數(shù); 4.確定測定波長(掃描); 5. 測定試樣; 6.測定試樣; 7.儀器復(fù)原。

物質(zhì)的紫外吸收光譜基本上是其分子中生色團(tuán)及助色團(tuán)的特征，而不是整個(gè)分子 的特征。 如果物質(zhì)組成的變化不影響生色團(tuán)和助色團(tuán)， 就不會(huì)顯著地影響其吸收光譜， 如甲苯和乙苯具有相同的紫外吸收光譜。另外，外界因素如溶劑的改變也會(huì)影響吸收 光譜，在極性溶劑中某些化合物吸收光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)會(huì)消失，成為一個(gè)寬帶。所以， 只根據(jù)紫外光譜是不能完全確定物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)，還必須與紅外吸收光譜、核磁共振 波譜、質(zhì)譜以及其他化學(xué)、物理方法共同配合才能得出可靠的結(jié)論。 化合物的鑒定 利用紫外光譜可以推導(dǎo)有機(jī)化合物的分子骨架中是否含有共軛結(jié)構(gòu)體系， c=c 如 -c=c、c=c-c=o、苯環(huán)等。利用紫外光譜鑒定有機(jī)化合物遠(yuǎn)不如利用紅外光譜有 效，因?yàn)楹芏嗷衔镌谧贤鉀]有吸收或者只有微弱的吸收，并且紫外光譜一般比較簡 單，特征性不強(qiáng)。利用紫外光譜可以用來檢驗(yàn)一些具有大的共軛體系或發(fā)色官能團(tuán)的 化合物，可以作為其他鑒定方法的補(bǔ)充。 (1)如果一個(gè)化合物在紫外區(qū)是透明的，則說明分子中不存在共軛體系，不含 有醛基、酮基或溴和碘。可能是脂肪族碳?xì)浠衔?、胺、腈、醇等不含雙鍵或環(huán)狀共 軛體系的化合物。 (2)如果在 210~250nm 有強(qiáng)吸收，表示有 k 吸收帶，則可能含有兩個(gè)雙鍵的共 軛體系，如共軛二烯或 α，β-不飽和酮等。同樣在 260，300，330nm 處有高強(qiáng)度 k 吸收帶，在表示有三個(gè)、四個(gè)和五個(gè)共軛體系存在。 (3)如果在 260~300nm 有中強(qiáng)吸收(ε=200~1 000)，則表示有 b 帶吸收， 體系中可能有苯環(huán)存在。 如果苯環(huán)上有共軛的生色基團(tuán)存在時(shí)， ε 可以大于 10 000。 則 (4)如果在 250~300nm 有弱吸收帶(r 吸收帶)，則可能含有簡單的非共軛并 含有 n 電子的生色基團(tuán)，如羰基等。 純度檢查 如果有機(jī)化合物在紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰，而雜質(zhì)在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸 收，則可利用紫外光譜檢驗(yàn)化合物的純度。如果有機(jī)化合物在紫外可見光區(qū)沒有明顯 的吸收峰，而雜質(zhì)在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，則可利用紫外光譜檢驗(yàn)化合物的純度。 異構(gòu)體的確定 異構(gòu)體的確 定 對(duì)于異構(gòu)體的確定，可以通過經(jīng)驗(yàn)規(guī)則計(jì)算出 λmax 值，與實(shí)測值比較，即可證 實(shí)化合物是哪種異構(gòu)體。如: 乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇式互變異構(gòu) 位阻作用的測定 由于位阻作用會(huì)影響共軛體系的共平面性質(zhì)，當(dāng)組成共軛體系的生色基團(tuán)近似處 于同一平面，兩個(gè)生色基團(tuán)具有較大的共振作用時(shí)，λmax 不改變，εmax 略為降低， 空間位阻作用較小;當(dāng)兩個(gè)生色基團(tuán)具有部分共振作用，兩共振體系部分偏離共平面 時(shí)，λmax 和 εmax 略有降低;當(dāng)連接兩生色基團(tuán)的單鍵或雙鍵被扭曲得很厲害，以 致兩生色基團(tuán)基本未共軛，或具有極小共振作用或無共振作用，劇烈影響其 uv 光譜 特征時(shí)，情況較為復(fù)雜化。在多數(shù)情況下，該化合物的紫外光譜特征近似等于它所含 孤立生色基團(tuán)光譜的"加合"。 氫鍵強(qiáng)度的測定 溶劑分子與溶質(zhì)分子締合生成氫鍵時(shí)，對(duì)溶質(zhì)分子的 uv 光譜有較大的影響。對(duì) 于羰基化合物，根據(jù)在極性溶劑和非極性溶劑中 r 帶的差別，可以近似測定氫鍵的強(qiáng) 度。溶劑分子與溶質(zhì)分子締合生成氫鍵時(shí)，對(duì)溶質(zhì)分子的 uv 光譜有較大的影響。對(duì) 于羰基化合物，根據(jù)在極性溶劑和非極性溶劑中 r 帶的差別，可以近似測定氫鍵的強(qiáng) 度。 定量分析 朗伯-比爾定律是紫外-可見吸收光譜法進(jìn)行定量分析的理論基礎(chǔ)，它的數(shù) 學(xué)表達(dá)式為: a = ε b c uv-2550

1、使用的吸收池必需潔凈，并注意配對(duì)使用。量瓶，移液 管均應(yīng)校正后使用。 2、取吸收池時(shí)，手應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)盛裝樣品以池體的 4/5 為度，使 用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用插鏡紙由上而下?lián)犑酶蓛?，檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池 放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。 3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在 0.3~0.7 之間為宜。 4、測定時(shí)除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶液為空白對(duì)照，采用 1cm 石英吸收 池，在規(guī)定峰+-2nm 以內(nèi)，測幾個(gè)點(diǎn)的吸收度或由儀器在規(guī)定波長附近自動(dòng)掃描測定，以 核對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確， 并以吸收度最大的波長作為測定波長， 除另有規(guī)定吸收 度最大波長應(yīng)在該品種下規(guī)定的測定波長+-2nm 以內(nèi) 5、供試品應(yīng)取 2 份，如為對(duì)照品比較法，對(duì)照品一般也應(yīng)取兩份。平行操作，每份結(jié)果對(duì) 平均值的偏差應(yīng)在+-0.5%以內(nèi) 6、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度會(huì)偏低，狹縫寬 度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)， 對(duì)于大部分被測品種， 可以使 用 2nm 縫寬。

紫外可見分光光度計(jì)UV1900

UV-1900成功實(shí)現(xiàn)了高精度和高可靠性測量的嚴(yán)格要求，可滿足各種應(yīng)用的要求，可用在生物研究、生物工業(yè)、藥物分析、制藥、教學(xué)研究、環(huán)保、食品衛(wèi)生、臨床檢驗(yàn)、衛(wèi)生防疫等領(lǐng)域。

* 寬廣的波長范圍，可滿足各個(gè)領(lǐng)域?qū)ΣㄩL范圍的要求

* 4nm、2nm、1nm、0.5nm、0.2nm、0.1nm六種光譜帶寬可根據(jù)用戶要求定制安裝，滿足藥典的嚴(yán)格要求

* 全自動(dòng)的設(shè)計(jì)理念，實(shí)現(xiàn)了最簡單的測量手段

* 大規(guī)模集成電路的設(shè)計(jì)大大提高了系統(tǒng)的擴(kuò)展性和可靠性

* 改良優(yōu)化的光路設(shè)計(jì)、進(jìn)口光源和接收器造就了系統(tǒng)高性能和高可靠性

* 豐富的測量方法，具有波長掃描、時(shí)間掃描、多波長測定、多階導(dǎo)數(shù)測定(選)、雙波長、三波長(選)DNA蛋白質(zhì)測量(選)等多種測量方法，可滿足 不同測量的要求，并可在6英寸大屏幕上直接顯示

* 根據(jù)用戶的要求可選配單孔架、手動(dòng)四連架、手動(dòng)八連架、自動(dòng)八連架、玻璃支架、試管架、1cm比色架、5cm比色架、10cm比色架等

* 測量數(shù)據(jù)可通過打印機(jī)輸出，具有USB接口

* 可斷電保存測量參數(shù)和數(shù)據(jù)，方便用戶使用

* 可通過PC控制實(shí)現(xiàn)更精確和靈活的測量，可滿足不同用戶的需求