薄層色譜掃描儀技術(shù)簡介

薄層色譜，分離后的物質(zhì)通過直接觀察，或者染色處理后觀察，或者在紫外燈照射下觀察。其中紫外照射熒光觀察是最常用的方法。

但是薄層色譜法具有操作簡單、快速，設(shè)備投資小、檢測運行成本低等特點，在各領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

3.光源:氘燈、鹵鎢燈、高壓汞燈(標準配置，自動轉(zhuǎn)換)

4.波長準確度:優(yōu)于1nm;波長重現(xiàn)性:優(yōu)于0.2nm

5.軟件:winCATS(Windows 2000/NT,32位操作系統(tǒng))

1.波長范圍寬、掃描速度快;

2.自動化程度高、操作簡便;

3.單色器性能好;

4.軟件功能強大;

5.技術(shù)世界領(lǐng)先。

薄層色譜掃描儀是對薄層色譜進行定量檢測分析的儀器，當前市場上有兩類薄層色譜掃描儀:

是一種全波長掃描儀，提供波長200-800nm范圍的可選波長，通過檢測樣品對光的吸收強弱確定物質(zhì)含量。該掃描儀也能檢測254nm或365nm紫外照射產(chǎn)生的熒光強度，從而進行特異性檢測。

傳統(tǒng)掃描儀的掃描方式分為:單光束掃描、雙光束掃描和雙波長掃描。

單光束掃描:采用單一光束(即單一波長掃描)，其結(jié)果就是上圖中一特定波長條件下的單條曲線。儀器結(jié)構(gòu)簡單，但是基線不穩(wěn)，實際中很少使用。

雙光束掃描:采用同一波長的兩個光束同步掃描，一個光束掃描樣品展開通道，另一個光束掃描樣品通道旁邊的空白區(qū)域，這樣就可扣除空白吸收，部分消除薄層板展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。但是無法消除垂至于展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。

雙波長掃描:兩個不同波長的光束交替掃描樣品展開的通道區(qū)域，波長選擇時，一個波長為樣品最大吸收位置，另一是吸收極小值位置。如上圖所示，如檢測目標為3(則最大吸收峰為290nm，極小值可選200nm、260nm或325nm)。這種方法可基本消除鋪板不均產(chǎn)生的誤差，因此掃描基線很穩(wěn)定。

以上各種掃描方式中，根據(jù)光源大小(掃描精度)不同可分為直線掃描和鋸齒掃描。

直線掃描:用可以覆蓋樣品展開通道的寬光束一次性掃完整個展開通道，即在展開方向上(圖中橫坐標)，每個點的數(shù)據(jù)只是一個掃描數(shù)據(jù)點。

鋸齒掃描:采用點狀光源，光點尺寸小于通道寬度，因此在展開方向移動到任何一點時，光源都要逐點沿樣品通道方向掃描，即形成"之"形(或鋸齒形掃描)。這樣，在展開方向上每一點的數(shù)據(jù)都是多個點掃描結(jié)果的累加值。鋸齒掃描的精度相對直線掃描明顯提高。

當前，在定量分析中，薄層掃描多采用雙波長鋸齒掃描。

分析誤差

薄層分析的誤差包括三個方面:點樣誤差、展開誤差、定位誤差和檢測誤差。

采用自動點樣器，誤差可控制在0.5%，熟練的分析人員用毛細管點樣，誤差小于1.0%，若用微量進樣器，誤差會大一些。

展開誤差來自鋪板的均勻性和樣品展開效果，若采用預制的高效薄層板，誤差會明顯降低，采用雙波長鋸齒掃描，也能有效降低展開誤差。

定位誤差值斑點的位置和大小判定，擴散、脫尾等易產(chǎn)生定位誤差。檢測誤差來自光源的穩(wěn)定性、光檢測器的穩(wěn)定性以及樣品對光吸收(或熒光產(chǎn)生)的線性度等方面。為減少這些誤差，需要非常精密的機電系統(tǒng)，這也直接導致產(chǎn)品高昂的價格。

通常情況下，薄層掃描分析的誤差在3%以下。

薄層數(shù)碼成像分析技術(shù)是利用數(shù)碼成像設(shè)備獲得薄層板上各點的光強度信息，之后對獲得圖像進行分析的薄層分析技術(shù)。數(shù)碼成像設(shè)備包括兩種:照相機和掃描儀(由于數(shù)碼掃描儀采用逐行成像技術(shù)，為便于區(qū)分傳統(tǒng)薄層掃描儀的逐點掃描，將數(shù)碼掃描儀稱為逐行掃描儀)。

和傳統(tǒng)薄層掃描一樣，照相機或逐行掃描儀都具有光檢測系統(tǒng)，它們都是將光量線性轉(zhuǎn)化為電信號的元件。不同的是，照相機和逐行掃描儀可進一步將電信號轉(zhuǎn)換成電腦圖像，圖像中單個點(像素)的顏色深淺反映了光的強弱。

因此，薄層數(shù)碼成像更接近人眼觀察檢測，結(jié)果更直觀，因此非常適合鑒別，特別是中藥指紋圖譜的識別。

數(shù)碼成像儀不僅能完成普通白光照射下的成像分析，再裝配254nm或365nm紫外燈后，也可以檢測特異熒光，特異熒光檢測。

根據(jù)數(shù)碼成像原理，薄層數(shù)碼成像從技術(shù)上可理解為單光源密集掃描。和傳統(tǒng)薄層掃描系統(tǒng)相比，由于使用單一光源，效果不如雙波長掃描(即無法消除鋪板不均產(chǎn)生的影響);而在掃描精度方面，卻要超過鋸齒掃描。

在光源穩(wěn)定均勻性控制方面，照相機采用一次性閃光，不存在穩(wěn)定性問題，但是照相機用點光源發(fā)散形成面光源照射到薄層板上，均勻性較難保證;逐行掃描儀采用線性光源，光源穩(wěn)定均勻性較傳統(tǒng)薄層掃描的光束要好。

數(shù)碼成像分析以圖像顯示，對斑點正確選擇可消除定位誤差。因此在采用預制高效薄層板分析時，數(shù)碼成像分析可獲得與傳統(tǒng)薄層掃描儀同等的定量精度和準確度。

在操作時間方面，照相機成像最快，逐行掃描儀需數(shù)秒或者幾十秒，而傳統(tǒng)薄層掃描儀通常要幾分鐘。

數(shù)碼成像分析的唯一不足在于只能使用白光、254nm、365nm和312nm等特定光源，而數(shù)碼成像的顯著優(yōu)勢是價格，比傳統(tǒng)薄層掃描儀低得多。

CAMAG TLC SCANNER 3 薄層色譜掃描儀是卡瑪公司四十余年研制薄層色譜儀器的智慧結(jié)晶，它有波長范圍寬、掃描速度快、自動化程度高及操作簡便等特點，是目前世界上最先進的薄層色譜掃描儀。

·掃描速度快(最快100mm/s)，強大的數(shù)據(jù)采集(達9600DPS)及數(shù)據(jù)傳輸(115200baud/s)，配合高精度測 量平臺(重現(xiàn)性X軸優(yōu)于100um，Y軸優(yōu)于50um)，保證掃描的準確度與重現(xiàn)性。采用20mm/s掃描速度對 每條軌道長80mm，有18條軌道的薄層板進行掃描，只需不到5分鐘就可完成包括計算和生成報告在內(nèi)的所有工作。

·最多一次能計算36條軌道，每條軌道最多可檢測100種組分。

·積分可采用自動或手動基線校正，自動或手動峰編輯。

·圖形外觀可方便地將物質(zhì)名稱與峰對應(yīng)。

·可對薄層板上所有檢測到的峰進行自動光譜掃描。

·靈活設(shè)置的報告可打印包含從帶有物質(zhì)名稱的2維模擬曲線到復雜的3維圖在內(nèi)的彩色圖像。

·數(shù)據(jù)文件還包括固定相、色譜圖數(shù)據(jù)和圖像等所有信息。

·定量計算支持以下校正功能:單水平校正，使用內(nèi)標或外標的線性校正，非線性回歸的多水平校正，相對 標準 偏差(cv)統(tǒng)計等。

·副成分計算(包含在定量計算內(nèi))可用來按照歐洲或美國藥典規(guī)定，通過和主成分比較來定量未知峰。

·雙波長掃描:色譜由兩個選定的不同波長進行掃描，積分時測量波長掃描的信號減去參比波長掃描的信號，用 來扣除背景干擾。雙波長掃描還可用于對未完全分離的峰進行定量。

·多波長掃描:色譜最多可用31種不同波長掃描，允許多重計算，以達到優(yōu)化選擇，定量計算時對每一片斷分 別選用最佳波長的數(shù)據(jù)。winCATS的這一功能是薄層色譜中獨一無二的。

·儀器校驗:可對掃描儀的機械、光路及電子功能進行自動監(jiān)控，并能進行自動調(diào)整，糾正偏差。校驗功能還可 應(yīng)用于自動點樣、自動展開儀等所有可由winCATS控制的儀器。

·軌道優(yōu)化:可對每一色譜軌道進行多次掃描，每次掃描位置略微側(cè)移，自動計算軌道的最高峰并用于定量，可 對歪曲的色譜進行正確計算。

·光譜掃描:可對所有軌道、所有斑點進行全光譜掃描，自動確認光譜位置，并獨有組分鑒別及純度鑒定功能。光譜記錄范圍可自由地在190nm到800nm選擇; 燈從D2到W燈自動轉(zhuǎn)換， 光譜記錄速度達100nm/s，光譜采集40次/nm，確保光譜掃描快速準確。

·光譜庫:卡瑪可提供常見藥物的光譜庫，與用戶自己建立的薄層色譜光譜庫結(jié)合，對不同薄層板上的光譜記錄 進行比較。

·符合美國FDA 21 CFR part 11有關(guān)電子記錄和電子簽名等的規(guī)范，具有工作日志，記錄所有操作信息、儀器

運行狀況(包括點樣、展開、掃描、成像等步驟中所有可用winCATS控制的儀器)、數(shù)據(jù)變動等。

1.離心薄層色譜儀 2.棒狀薄層色譜儀 3.手動薄層色譜儀 4.雙波長薄層色譜掃描儀 5.全自動薄層色譜儀 6.旋轉(zhuǎn)薄層色譜儀 7.全波長薄層色譜儀 8.全能型薄層色譜儀 9.二極管陣列薄層色譜掃描儀 10.加壓薄層色譜儀 11.暗箱式薄層色譜攝影儀

中心實驗室具有各種精密儀器300余臺(件)，總價值達3000余萬元，擁有以下儀器設(shè)備，·超純水制備系統(tǒng)、高效液相色譜儀、·制備型液相色譜儀、·氣相色譜儀、·氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、·原子吸收分光光度計、·熒光分光光度計、·流動注射分析儀、·原子熒光光度計、·薄層色譜掃描儀、·等離子發(fā)射光譜、·全自動氨基酸分析儀、·液氮罐、制冰機、高壓滅菌器、·超凈工作臺、·生物安全柜、·各種型號移液器、·電熱恒溫鼓、風干燥箱、·天平、·離心機(普通常溫、冷凍高速、超速等)、·普通光學顯微鏡、熒光顯微鏡、生物解剖鏡、·冰箱(2-8℃、–20℃、–40℃、–70℃、–80℃)、·培養(yǎng)箱(普通培養(yǎng)箱、隔水恒溫培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱)等。