采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種權(quán)利要求

1.一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：采用呼吸塑料袋作為正式培養(yǎng)的容器，經(jīng)過母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟制作出大袋蘑菇栽培種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述制作步驟為：

（1）母種的活化培養(yǎng)步驟：由保存菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)獲得母種；

（2）原種的預(yù)培養(yǎng)步驟：將母種進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)獲得原種；

（3）正式培養(yǎng)步驟：將呼吸塑料袋裝入高壓滅菌鍋中，對袋內(nèi)小麥培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌，高壓滅菌后，待塑料袋和小麥培養(yǎng)基冷卻至常溫，然后將步驟（2）預(yù)培養(yǎng)獲得的原種接種于所述呼吸塑料袋中小麥培養(yǎng)基進(jìn)行正式培養(yǎng)，培養(yǎng)過程培養(yǎng)室溫度保持20～25℃，培養(yǎng)13～16天待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養(yǎng)完畢，將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述母種的活化培養(yǎng)步驟為：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，將安瓿管中的菌株接種于PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，PDA培養(yǎng)基為常用的真菌培養(yǎng)基：200克馬鈴薯切片加入1000毫升水煮沸20分鐘，過濾后加入20克葡萄糖和15～18克瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000毫升，后經(jīng)121℃/0.1兆帕進(jìn)行20分鐘高壓滅菌而成；培養(yǎng)溫度為22～24℃；當(dāng)菌絲長滿PDA培養(yǎng)基時，培養(yǎng)完畢，將活化培養(yǎng)完的母種切成12～15毫米的小塊切片，備制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟使用。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述原種的預(yù)培養(yǎng)步驟中：采用的原種培養(yǎng)基為，均按照質(zhì)量份數(shù)；21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發(fā)酵14～16天后，曬干后，34～36份發(fā)酵棉籽殼加入1～2份蛭石、1～2份膨脹珍珠巖、1份CACO₃和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養(yǎng)基；將裝有原種培養(yǎng)基的容器在高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行高壓滅菌，在126℃/0.15兆帕進(jìn)行80～120分鐘的滅菌處理，滅菌后，使其冷卻至常溫，將母種的活化培養(yǎng)后的切片投入預(yù)培養(yǎng)容器進(jìn)行接種；預(yù)培養(yǎng)溫度為22～24℃，預(yù)培養(yǎng)18～22天。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述預(yù)培養(yǎng)容器采用1000毫升的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶，并按照1000毫升的原種培養(yǎng)容器中裝入900毫升的原種培養(yǎng)基，每個預(yù)培養(yǎng)容器中接種1～3個母種切片。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述正式培養(yǎng)步驟培養(yǎng)過程為：

a）小麥培養(yǎng)基的調(diào)質(zhì)：所述小麥培養(yǎng)基調(diào)質(zhì)的整個過程在旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋中進(jìn)行，往旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋加入占旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋容積40％的小麥培養(yǎng)基：按重量份，其中小麥82～91份，膨脹珍珠巖5～10份，輕質(zhì)碳酸鈣2～4份和石膏2～4份；關(guān)閉進(jìn)料口，讓旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋旋轉(zhuǎn)五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進(jìn)料口注入占旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋容積20％的水；最后再關(guān)閉進(jìn)料口，打開進(jìn)汽閥門，通入高壓蒸汽，對旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋內(nèi)小麥培養(yǎng)基進(jìn)行蒸煮，蒸煮溫度110℃，壓力0.08兆帕，維持15～20分鐘，蒸煮結(jié)束的小麥培養(yǎng)基倒出進(jìn)行攤晾冷卻，冷卻至室溫；

b）小麥培養(yǎng)基的裝袋、滅菌：將小麥培養(yǎng)基裝入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋長寬厚規(guī)格為：630毫米×360毫米×80微米，帶有2個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入6千克的小麥培養(yǎng)基或495×320毫米×60微米，帶有1個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入3千克的小麥培養(yǎng)基；并采用高壓滅菌鍋在126℃/0.15兆帕下進(jìn)行滅菌處理，高壓滅菌時間為120～150分鐘；并在高壓滅菌鍋中冷卻至室溫；

c）小麥培養(yǎng)基接種：在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為1000級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進(jìn)行接種操作；接種量為每個呼吸塑料袋，6千克接入180～230毫升的原種或者每個呼吸塑料袋，3千克接入90～120毫升的原種，接種后，用封口機(jī)將呼吸塑料袋封口，并進(jìn)行翻袋混合，翻袋次數(shù)10～15次；在培養(yǎng)溫度為20～25℃下培養(yǎng)13～16天，待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養(yǎng)完畢移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。

7.一種如權(quán)利要求2、3、4、5或6所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中用到的高壓滅菌鍋，包括整個常規(guī)的臥式高壓滅菌鍋，其特征在于：所述臥式高壓滅菌鍋的鍋體上還設(shè)置有抽真空系統(tǒng)和空氣凈化系統(tǒng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中用到的高壓滅菌鍋，其特征在于：所述鍋體上設(shè)置的抽真空系統(tǒng)包括真空泵，所述真空泵通過閥門由三通管道一端連接鍋體，該三通管道的另一端設(shè)置一閥門作為排氣孔；所述空氣凈化系統(tǒng)包括空壓機(jī)，所述空壓機(jī)通過一閥門由管道連接一空氣過濾器；所述空氣過濾器通過一閥門由管道連接鍋體，該閥門與鍋體間的管道上設(shè)置有一安全閥。

9.一種如權(quán)利要求8所述的高壓滅菌鍋在采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中的使用方法，其特征在于：將小麥培養(yǎng)基在所述高壓滅菌鍋中按照常規(guī)高壓滅菌操作進(jìn)行滅菌處理，滅菌結(jié)束后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥門，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵，同時打開真空泵處閥門，通過真空泵直接排出濕熱空氣，當(dāng)鍋體的壓力表降到0.05兆帕，立即關(guān)閉真空泵和真空泵處閥門，同時啟動空壓機(jī)，打開空壓機(jī)處閥門和空氣過濾器處閥門，通過空氣過濾器向高壓鍋鍋體吹入潔凈空氣，防止雜菌進(jìn)入鍋體，進(jìn)而進(jìn)入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門，通過排氣孔直接排出濕熱空氣，保持鍋體的壓力表為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體上的溫度計(jì)觀察溫度。

《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》屬于微生物技術(shù)及其設(shè)備領(lǐng)域，更具體涉及一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種。

圖1是母種的活化培養(yǎng)步驟流程圖，其中10表示從液氮保藏罐取出的安瓿管，裝有保存菌株；11表示液氮保藏罐；12表示裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿；S1表示母種在PDA培養(yǎng)基中的活化培養(yǎng)；14表示在培養(yǎng)皿中繼續(xù)進(jìn)行母種的活化培養(yǎng)狀態(tài)；16表示母種在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)完畢；18表示活化培養(yǎng)的母種切片。

圖2是原種的預(yù)培養(yǎng)步驟流程圖，其中18表示活化培養(yǎng)的母種切片，20為裝有原種培養(yǎng)基的容器，21為高壓滅菌鍋，S2是對裝入容器20的原種培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的步驟，S3是對原種培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌后，使其冷卻至常溫的步驟，S4是在原種培養(yǎng)基中接種預(yù)先制得的母種的步驟，步驟S5是使接種了母種的原種培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)的步驟。

圖3表示正式培養(yǎng)步驟流程圖，其中30為裝有小麥培養(yǎng)基的呼吸塑料袋，32為呼吸塑料袋上的呼吸膜，22為裝有預(yù)培養(yǎng)完成的原種的容器，步驟S6是對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基進(jìn)行裝入殺菌車滅菌的步驟，步驟S7是使滅菌后的呼吸塑料袋30冷卻至室溫的步驟，步驟S8為冷卻后，將預(yù)培養(yǎng)步驟制得的原種接種到呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基中的步驟，步驟S9為接種原種的小麥培養(yǎng)基進(jìn)行正式培養(yǎng)的步驟，S10為正式培養(yǎng)結(jié)束的大袋栽培種裝箱后移入冷庫保藏步驟，S11為制作結(jié)束。

圖4為旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋構(gòu)造示意圖，其中，34為旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋鍋體，36為進(jìn)料口，38為溫度計(jì)，40為壓力表，42為進(jìn)汽閥門，44為出汽噴頭，46為出料口。

圖5為《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的高壓滅菌鍋構(gòu)造示意圖，其中，48為高壓滅菌鍋體，49為產(chǎn)蒸汽鍋爐，50為空氣過濾器，51為空壓機(jī)處閥門，52為空壓機(jī)，54為蒸汽進(jìn)氣閥門，56為空氣過濾器處閥門，60為排氣孔處閥門，62為排氣孔，64為鍋體的壓力表，66為鍋體上的溫度計(jì)，68為真空泵，69為安全閥，70為真空泵處閥門，72為裝入呼吸袋的殺菌車。

圖6是該發(fā)明的制作過程流程圖。

采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種專利目的

《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的目的是提供一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術(shù)，包括制作方法，制作過程中用到的設(shè)備和該設(shè)備的使用方法，采用呼吸塑料袋并結(jié)合該發(fā)明特殊的制作步驟和設(shè)備，可大量迅速生產(chǎn)蘑菇大包裝栽培種，同時可降低制造成本，使操作達(dá)到自動化并節(jié)省人力的可靠的蘑菇菌種制作方法；在制作過程中實(shí)現(xiàn)高壓滅菌、無菌冷卻一體化，保證了菌種制作的質(zhì)量，又節(jié)約了時間成本，操作簡便，易于機(jī)械化生產(chǎn)，節(jié)省勞動力；成品率高；具有顯著的經(jīng)濟(jì)效率。

采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術(shù)方案

《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法：采用呼吸塑料袋作為正式培養(yǎng)的容器，經(jīng)過母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟制作出大袋蘑菇栽培種。

所述制作步驟為：

（1）母種的活化培養(yǎng)步驟：由保存菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)獲得母種；

（2）制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟：將母種進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)獲得原種；

（3）正式培養(yǎng)步驟：將呼吸塑料袋裝車推入高壓滅菌鍋中，對小麥培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌，高壓滅菌后，小麥培養(yǎng)基冷卻至常溫，然后將步驟（2）預(yù)培養(yǎng)獲得的原種接種于所述呼吸塑料袋中小麥培養(yǎng)基進(jìn)行正式培養(yǎng)，培養(yǎng)過程培養(yǎng)室溫度保持20～25℃；培養(yǎng)13～16天待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養(yǎng)完畢將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。

采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種改善效果

（1）使用呼吸塑料袋生產(chǎn)大袋蘑菇栽培種，并在接種過程中將原種和小麥培養(yǎng)基充分混合均勻，縮短了每個菌絲體之間的生長距離，并縮短了培養(yǎng)完成的時間，只需要13～16天時間，一般只有傳統(tǒng)瓶裝菌種培養(yǎng)時間的三分之一到一半。蘑菇栽培種的生產(chǎn)多在夏秋溫度較高的期間進(jìn)行，需要空調(diào)進(jìn)行制冷調(diào)節(jié)，縮短培養(yǎng)時間意味著可以節(jié)約大量能源。

（2）使用呼吸塑料袋生產(chǎn)大袋蘑菇栽培種，由于原種和小麥培養(yǎng)基混合均勻，袋內(nèi)各處菌絲體的菌齡基本一致，都不超過16天，而傳統(tǒng)瓶裝菌種上下菌齡相差30～35天，造成菌種剛走到底，瓶口附近菌絲體已經(jīng)接近老化。

（3）由于大袋蘑菇栽培種的制作要比傳統(tǒng)瓶裝栽培種要求更高的潔凈度環(huán)境下，按該發(fā)明要求進(jìn)行制作，大袋蘑菇栽培種比傳統(tǒng)瓶裝栽培種染菌率較低，提高成品率4～6％。

（4）由于大袋蘑菇栽培種菌齡短，質(zhì)地疏松，又是塑料袋包裝，使用方便，開袋即用，使菌絲體受到最小的損傷，而傳統(tǒng)的瓶裝菌種菌齡長，質(zhì)地較硬，又是開口相對較小的瓶口，使用過程需要用器械摳扒，不僅費(fèi)力費(fèi)時，不利于蘑菇規(guī)?；耘?，而且菌絲體受到較大損傷，在播種到栽培料理需要更長的恢復(fù)時間，一定程度上影響產(chǎn)量。

（5）由于大袋蘑菇栽培種使用呼吸塑料包裝，無論在生產(chǎn)、儲存和運(yùn)輸過程，破損度很低，不足0.5％，而傳統(tǒng)的瓶裝栽培種使用易碎的玻璃瓶，每個過程度都存在破碎的隱患，玻璃瓶年損耗率在5～10％，也嚴(yán)重制約中國蘑菇栽培種的出口。

（6）由于大袋蘑菇栽培種的包裝材料——塑料為一次性容器使用（當(dāng)然可作為塑料米原料重新回收利用），菌種采購后僅需支付運(yùn)費(fèi)作為菌種款的額外費(fèi)用，而傳統(tǒng)的瓶裝栽培種的玻璃須反復(fù)使用，體積大，使用過程不僅要支付運(yùn)費(fèi)（由于重量幾乎是呼吸塑料袋菌種的2倍，需要多支付1倍的運(yùn)費(fèi)），還要支付摳種、清洗和倉儲等費(fèi)用。

（7）大袋蘑菇栽培種由于生產(chǎn)周期短，節(jié)約了大量電能；由于操作簡便，易于機(jī)械化生產(chǎn)，節(jié)省了勞動力；成品率的提高等等因素使得每袋成本控制在15～17元左右（而生產(chǎn)同樣重量的傳統(tǒng)瓶裝栽培種成本要超過25元），而且運(yùn)輸成本降低一半，采用該技術(shù)后可使中國蘑菇栽培種參與國際競爭（售價只有國際的1/4）

（8）該發(fā)明采用的高壓滅菌鍋，在普通的臥式高壓滅菌鍋的鍋體上設(shè)置抽真空系統(tǒng)和空氣凈化系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了在小麥培養(yǎng)基高壓滅菌處理后，在無菌的環(huán)境下進(jìn)行快速冷卻，而且將滅菌與冷卻步驟整體化，操作方便快捷，節(jié)約時間，有效的保證了菌種的質(zhì)量。

進(jìn)行蘑菇（這里通常指雙孢蘑菇的白色種、奶色種以及棕色種，拉丁學(xué)名Agaricus bisporusLanger）的人工栽培時，首先要制作好栽培種，才能保證將來栽培有好的收獲。中國是雙孢蘑菇生產(chǎn)大國，僅福建省雙孢蘑菇年產(chǎn)量就占世界的10％，全國原種需要量為200～260萬瓶，栽培種為1.0～1.5億瓶，產(chǎn)值在2～3億元。福建省的雙孢蘑菇選育種技術(shù)已達(dá)國際先進(jìn)水平，育成雜交新菌株AS2796（閩4號）及其選育方法已獲專利公開（CN1125034），在全國廣泛使用。2009年4月前蘑菇菌種制作工藝和設(shè)備卻大都停留在手工作坊狀態(tài)，生產(chǎn)工藝較落后，生產(chǎn)效率偏低，不少工序仍依賴手工（菌種菌齡上下不一，生長緩慢），遠(yuǎn)不能滿足栽培種的生產(chǎn)需求，而傳統(tǒng)的菌種采用玻璃瓶，其缺陷顯著：易碎、自身重量大、運(yùn)輸不便、使用也不方便等制約其發(fā)展前景。中國國內(nèi)在使用塑料袋方面，仍未擺脫瓶頸的約束，而且沒有解決好塑料強(qiáng)度與呼吸性兩大難題，雖然降低了單位包裝成本，但成品率卻下降，同樣無法大規(guī)模應(yīng)用。以上這些因素使選育出的優(yōu)質(zhì)菌株無法更好的推廣，而各地分散生產(chǎn)的栽培種質(zhì)量無保證，每年都有大量不合格菌種投入生產(chǎn)，減產(chǎn)幅度為10～15％，而且造成中國成為蘑菇出口大國的同時，而蘑菇菌種的出口幾乎為零。

此外，常規(guī)的高壓滅菌鍋不能實(shí)現(xiàn)在培養(yǎng)基高壓滅菌后保證無菌條件下快速冷卻，從而不能保證菌種制作的質(zhì)量。

采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種制作步驟

所述制作步驟為：

（1）母種的活化培養(yǎng)步驟：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，將安瓿管中的菌株接種于PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；PDA培養(yǎng)基為常用的真菌培養(yǎng)基（200克馬鈴薯切片加入1000毫升水煮沸20分鐘，過濾后加入20克葡萄糖和15～18克瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000毫升，后經(jīng)121℃/0.1兆帕進(jìn)行20分鐘高壓滅菌而成）；培養(yǎng)溫度為22～24℃；當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)基時，培養(yǎng)完畢，將活化培養(yǎng)完的母種切成12～15毫米的小塊切片，備制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟使用。

（2）制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟：所述制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟中：采用的原種培養(yǎng)基為，均按照質(zhì)量份數(shù)：21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發(fā)酵14～16天后，曬干后，34～36份發(fā)酵棉籽殼加入1～2份蛭石、1～2份膨脹珍珠巖、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養(yǎng)基；將裝有原種培養(yǎng)基的容器在高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行高壓滅菌，在126℃/0.15兆帕進(jìn)行80～120分鐘的滅菌處理，滅菌后，使其冷卻至常溫，將母種切片投入預(yù)培養(yǎng)容器進(jìn)行接種；預(yù)培養(yǎng)溫度為22～24℃，預(yù)培養(yǎng)18～22天；所述預(yù)培養(yǎng)容器采用1000毫升的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶，并按照1000毫升的預(yù)培養(yǎng)容器中裝入900毫升的原種培養(yǎng)基，每個預(yù)培養(yǎng)容器中接種1～3個切片。

（3）正式培養(yǎng)步驟培養(yǎng)：

a）所述小麥培養(yǎng)基調(diào)質(zhì)的整個過程在旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋中進(jìn)行，往旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋加入占旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋容積40％的小麥培養(yǎng)基，其中按照質(zhì)量份小麥82～91份，膨脹珍珠巖5～10份，輕質(zhì)碳酸鈣2～4份和石膏2～4份；關(guān)閉進(jìn)料口，讓旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋旋轉(zhuǎn)五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進(jìn)料口注入占旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋容積20％的水；最后再關(guān)閉進(jìn)料口，打開進(jìn)汽閥門，通入高壓蒸汽，對旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋內(nèi)小麥培養(yǎng)基進(jìn)行蒸煮，蒸煮溫度110℃，壓力0.08兆帕，維持15～20分鐘，蒸煮結(jié)束的小麥培養(yǎng)基倒出進(jìn)行攤晾冷卻，冷卻至室溫；

b）小麥培養(yǎng)基的裝袋、滅菌：將小麥培養(yǎng)基裝入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋長寬厚規(guī)格為：630毫米×360毫米×80微米，帶有2個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入6千克的小麥培養(yǎng)基或495×320毫米×60微米，帶有1個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入3千克的小麥培養(yǎng)基；并將呼吸塑料袋裝入殺菌車采用高壓滅菌鍋在126℃/0.15兆帕下進(jìn)行滅菌處理，高壓滅菌時將為120～150分鐘；并在高壓滅菌鍋中冷卻至室溫；

c）小麥培養(yǎng)基接種：在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為1000級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進(jìn)行接種操作；接種量為每個呼吸塑料袋（6千克）接入180～230毫升的原種或者每個呼吸塑料袋（3千克）接入90～120毫升的原種，接種后，用封口機(jī)將呼吸塑料袋封口，并進(jìn)行翻袋混合，翻袋次數(shù)10～15次；在培養(yǎng)溫度為20～23℃下培養(yǎng)13～16天后，待呼吸塑料袋長滿菌絲正式培養(yǎng)完畢，將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。

以上小麥培養(yǎng)基的滅菌采用的高壓滅菌鍋，是在常規(guī)的臥式高壓滅菌鍋上進(jìn)行改進(jìn)，即在臥式高壓滅菌鍋的鍋體設(shè)置抽真空系統(tǒng)和空氣凈化系統(tǒng)：所述鍋體上設(shè)置的抽真空系統(tǒng)包括真空泵，所述真空泵通過閥門由三通管道一端連接鍋體，該三通管道的另一端設(shè)置一閥門作為排氣孔；所述空氣凈化系統(tǒng)包括空壓機(jī)，所述空壓機(jī)通過一閥門由管道連接一空氣過濾器；所述空氣過濾器通過一閥門由管道連接鍋體，該閥門與鍋體間的管道上設(shè)置有一安全閥。

結(jié)合附圖5說明高壓滅菌鍋的使用方法為：將小麥培養(yǎng)基在所述高壓滅菌鍋體48中按照常規(guī)高壓滅菌操作進(jìn)行滅菌處理，滅菌結(jié)束后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥門54，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵68，同時打開真空泵處閥門70，通過真空泵68直接排出濕熱空氣，當(dāng)鍋體的壓力表64上的示數(shù)降到0.05兆帕，立即關(guān)閉真空泵68和真空泵處閥門70，同時啟動空壓機(jī)52，打開空壓機(jī)處閥門51和空氣過濾器處閥門56，通過空氣過濾器50向高壓鍋鍋體48內(nèi)吹入潔凈空氣，防止雜菌進(jìn)入鍋體，進(jìn)而進(jìn)入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門60，通過排氣孔62直接排出濕熱空氣，保持鍋體48的壓力表64為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體48上的溫度計(jì)66觀察溫度。

優(yōu)異效果對比數(shù)據(jù)

表1中，對傳統(tǒng)使用的瓶裝栽培種和用上述方法制作的大袋蘑菇栽培種進(jìn)行比較

*注：每個呼吸塑料袋可裝麥粒菌種6千克或3千克，相當(dāng)于750毫升玻璃瓶麥粒菌種15瓶或8瓶

表1中以容量為6千克呼吸塑料袋為例，對瓶裝生產(chǎn)蘑菇栽培種和使用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種，具備較大差異的部分進(jìn)行了總結(jié)。

采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種實(shí)施案例

• 實(shí)施例

在蘑菇的大袋栽培種制作中，分為三步進(jìn)行，首先是由保存菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)獲得母種，稱為活化培養(yǎng)步驟S1，其次將母種進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)獲得原種，稱之為預(yù)培養(yǎng)步驟S5，最后將預(yù)培養(yǎng)獲得的原種接入裝有小麥培養(yǎng)基（濕重6千克）的呼吸塑料袋30中，在所述小麥培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)栽培種，稱為正式培養(yǎng)步驟S9，上述呼吸塑料袋30裝入小麥培養(yǎng)基后，均要在高壓滅菌鍋中作高壓滅菌，然后使小麥培養(yǎng)基和呼吸塑料袋30冷卻至室溫，再把預(yù)培養(yǎng)后獲得原種接入至上述塑料參考附圖對該實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明。

《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的蘑菇大袋栽培種制作方法的特征是，包括母種的活化培養(yǎng)步驟，制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟，以及將原種接入大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟。以下，依次對母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟和接種大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟進(jìn)行說明。

圖1-3是用于蘑菇菌種的母種活化培養(yǎng)步驟、原種的預(yù)培養(yǎng)步驟和大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟的說明圖。

圖1表示母種的活化培養(yǎng)步驟。該圖中，10表示從液氮保藏罐取出的安瓿管，裝有保存菌株。首先將安瓿10中的菌株接種于PDA培養(yǎng)基12。PDA培養(yǎng)基12的為常用的真菌培養(yǎng)基（200克馬鈴薯切片加入1000毫升水煮沸20分鐘，過濾后加入20克葡萄糖和15～18克瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000毫升，后經(jīng)121℃/0.1兆帕進(jìn)行20分鐘高壓滅菌而成）。步驟S1為PDA培養(yǎng)基12中的母種的活化培養(yǎng)步驟。該實(shí)施狀態(tài)中制作的是雙孢蘑菇菌種。步驟S1的活化培養(yǎng)步驟中的培養(yǎng)溫度為22～24℃。

14表示在PDA培養(yǎng)基12種繼續(xù)進(jìn)行母種的活化培養(yǎng)狀態(tài)。繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)后，蘑菇菌絲長滿PDA培養(yǎng)基。16表示在PDA培養(yǎng)基12上培養(yǎng)完畢。切片18表示活化培養(yǎng)的母種切片狀態(tài)。預(yù)培養(yǎng)時使用切成12～15毫米的小塊的多個切片18。

圖2表示原種的預(yù)培養(yǎng)步驟。預(yù)培養(yǎng)是指在較大的容器內(nèi)制備原種的預(yù)培養(yǎng)步驟。

20為培養(yǎng)原種的容器。該實(shí)施狀態(tài)中，裝有原種培養(yǎng)基的容器20是1000毫升的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶。采用的原種培養(yǎng)基為，均按照質(zhì)量份數(shù)：21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發(fā)酵14～16天后，曬干后，34～36份發(fā)酵棉籽殼加入1～2份蛭石、1～2份膨脹珍珠巖、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養(yǎng)基。

步驟S2是對裝入容器20的原種培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的步驟。該實(shí)施狀態(tài)中，高壓滅菌鍋用作高壓滅菌，在126℃/0.15兆帕進(jìn)行80～120分鐘的滅菌處理。

步驟S3是對原種培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌后，使其冷卻至常溫的步驟。

步驟S4是在原種培養(yǎng)基中接種預(yù)先用PDA培養(yǎng)基12制得的母種的步驟。將前述培養(yǎng)后的PDA培養(yǎng)基12的1～3個母種切片18投入容器20種進(jìn)行接種。

步驟S5是使接種了母種的原種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的步驟。該實(shí)施狀態(tài)中培養(yǎng)溫度為22～24℃，培養(yǎng)18～22天，該步驟稱為預(yù)培養(yǎng)步驟。

通過預(yù)培養(yǎng)完成原種的預(yù)培養(yǎng)后，進(jìn)入正式培養(yǎng)。

圖3表示正式培養(yǎng)步驟。正式培養(yǎng)中，使用裝有小麥培養(yǎng)基的呼吸塑料袋30，將預(yù)培養(yǎng)中獲得的原種接種于小麥培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。呼吸塑料袋30在該實(shí)施狀態(tài)采用600毫米×300毫米×80微米（長:寬:厚），可裝入6千克的小麥培養(yǎng)基，帶有2個35毫米×35毫米呼吸膜32或495×320毫米×60微米（長:寬:厚），可裝入3千克的小麥培養(yǎng)基，帶有1個35毫米×35毫米呼吸膜32。

正式培養(yǎng)過程中，首先，要對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基進(jìn)行調(diào)制，圖4表示旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋構(gòu)造，這個過程要在旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋34內(nèi)完成，通過進(jìn)料口36往旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋34加入旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋34容積40％的小麥培養(yǎng)基（其中按照質(zhì)量份小麥82～91份，膨脹珍珠巖5～10份，輕質(zhì)碳酸鈣2～4份和石膏2～4份）。然后關(guān)閉進(jìn)料口36，讓旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋34旋轉(zhuǎn)五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進(jìn)料口36注入水（旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋34體積的20％）。最后再關(guān)閉進(jìn)料口36，打開進(jìn)汽閥門42，通入高壓蒸汽，由出汽噴頭44對旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋34內(nèi)小麥培養(yǎng)基進(jìn)行蒸煮，通過觀察溫度計(jì)38和壓力表40，來對進(jìn)汽閥42進(jìn)行高壓蒸汽調(diào)節(jié)，該實(shí)施狀態(tài)中蒸煮溫度110℃，壓力0.08兆帕，維持15～20分鐘，整個蒸煮過程的時間大概在40分鐘，蒸煮結(jié)束后小麥由出料口46倒出進(jìn)行攤晾冷卻，冷卻時室溫后裝入呼吸塑料袋30。

步驟S6是對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的步驟。該滅菌步驟采用的是高壓滅菌。該實(shí)施狀態(tài)中，使用如具體實(shí)施方式中描述的改進(jìn)的高壓滅菌鍋，在高壓滅菌鍋中推入裝著呼吸塑料袋30的殺菌車72，對呼吸塑料袋30進(jìn)行高壓滅菌。該實(shí)施狀態(tài)中，在126℃/0.15兆帕進(jìn)行120～150分鐘的滅菌處理。

步驟S7是使滅菌后的呼吸塑料袋30冷卻至室溫的步驟。該冷卻步驟中，如圖5所示，最好在滅菌結(jié)束后，將小麥培養(yǎng)基在所述高壓滅菌鍋體48中按照常規(guī)高壓滅菌操作進(jìn)行滅菌處理，滅菌結(jié)束后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥門54，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵68，同時打開真空泵處閥門70，通過真空泵68直接排出濕熱空氣，當(dāng)鍋體的壓力表64上的示數(shù)降到0.05兆帕，立即關(guān)閉真空泵68和真空泵處閥門70，同時啟動空壓機(jī)52，打開空壓機(jī)處閥門51和空氣過濾器處閥門56，通過空氣過濾器50向高壓鍋鍋體48內(nèi)吹入潔凈空氣，防止雜菌進(jìn)入鍋體，進(jìn)而進(jìn)入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門60，通過排氣孔62直接排出濕熱空氣，保持鍋體48的壓力表64為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體48上的溫度計(jì)66觀察溫度，進(jìn)入隨后的栽培種接種階段。

步驟S8為冷卻后，將預(yù)培養(yǎng)步驟制得的原種接種到呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基中的步驟。接種栽培種時，為了不混入雜菌，必須十分小心。該實(shí)施狀態(tài)中，在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為1000級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進(jìn)行接種操作。該實(shí)施狀態(tài)中，接種量為每個呼吸塑料袋（6千克）接入180～230毫升的原種或者每個呼吸塑料袋（3千克）接入90～120毫升的原種，接種后，呼吸塑料袋30馬上用封口機(jī)進(jìn)行熱熔封口，并將原種和小麥培養(yǎng)基在呼吸塑料袋30里進(jìn)行翻袋混合，該實(shí)施狀態(tài)中，翻袋次數(shù)10～15次。

步驟S9為接種原種的小麥培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的步驟。46為裝著接種過原種的培養(yǎng)基的呼吸塑料袋，且原種和小麥培養(yǎng)基完全混合。該實(shí)施狀態(tài)中培養(yǎng)溫度為20～25℃，培養(yǎng)13～16天，待呼吸塑料袋長滿菌絲正式培養(yǎng)結(jié)束，該步驟稱為正式培養(yǎng)步驟。

步驟S10為正式培養(yǎng)后的大袋栽培種裝箱后移入冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。

2016年12月7日，《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》獲得第十八屆中國專利優(yōu)秀獎。

蘑菇釘?shù)姆诸?

蘑菇釘從構(gòu)造上可分為：正封蘑菇釘（概述圖）、反封蘑菇釘，因生產(chǎn)模具不同，其中蘑菇釘高度和弧度各有差別。

蘑菇釘從表面處理工藝上可分為：電鍍蘑菇釘（青古銅、白鎳、槍色、古掃等相同顏色中有分環(huán)保無毒的），烤漆類蘑菇釘。