組培材料:中華短腸蕨根狀莖莖尖。
外植體的滅菌消毒與接種:取2厘米長的根狀莖莖尖,去掉雜質(zhì)及莖尖周圍的絨毛等附屬物,洗凈,用流水沖洗2-3小時(shí),在超凈工作臺上,先用70%酒精處理30-60秒,用無菌水沖洗2-3次,再用0.02%的升汞加少許表面濕潤劑吐溫的消毒液消毒5分鐘,然后用用無菌水沖洗3-5次,取出莖尖切取1厘米長保持極性接種于培養(yǎng)基表面。
培養(yǎng)基的配制與滅菌:以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。中華短腸蕨的根狀莖莖尖的培養(yǎng)常用MS培養(yǎng)基,以濃度為0.5毫克/升時(shí),對根的生長發(fā)育最適合。BA(1.0毫克/升)NAA(0.1毫克/升),此時(shí)產(chǎn)生的芽數(shù)最多,芽生長較快,芽粗,生長茁壯。培養(yǎng)基和培養(yǎng)容器的滅菌采用高壓濕熱消毒法,即將分裝好的培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等實(shí)驗(yàn)器具置于D-1型自動(dòng)蒸汽滅菌鍋內(nèi),在溫度為121℃、壓力為1千克/立方厘米的環(huán)境中滅菌15-20分鐘。
接種:以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,NAA濃度對根系的生長影響較大,以濃度為0.5毫克/升時(shí),適合根的生長發(fā)育。BA(1.0毫克/升)NAA(0.1毫克/升)時(shí)產(chǎn)生的芽數(shù)最多,芽生長較快,芽粗,生長茁壯。
試管苗的移栽:當(dāng)根長到3-4厘米、莖高4-5厘米時(shí),將瓶蓋打開,將培養(yǎng)容器在自然條件下培養(yǎng)7天左右,然后打開蓋子,于室內(nèi)自然光照下再放3天,然后用鑷子輕輕取出幼苗,用自來水將根系上的瓊脂沖洗干凈,再用0.01%高錳酸鉀浸泡3-5分鐘,稍微晾干后移栽到用1%高錳酸鉀溶液消毒過的泥炭土和蛭石(2:1)混合土中,濕度保持在90%以上,薄膜覆蓋1周后揭膜,成活率在90%以上。移栽時(shí),最適溫度控制在25℃左右,超過28℃以上容易引起爛苗。