elisa試劑盒

試劑

(1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):

Na2CO3 1.59克

NaHCO3 2.93克

加蒸餾水至1000ml

(2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M

KH2PO4 0.2克

Na2HPO4·12H2O 2.9克

NaCl 8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05% 0.5ml

加蒸餾水至1000ml

(3) 稀釋液:

牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。

(4) 終止液(3M H2SO4):

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml

0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml

加蒸餾水50ml。

(6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml

底物緩沖液(PH5.5) 10ml

0.75%H2O2 32μl

(7) ABTS使用液:

ABTS 0.5mg

底物緩沖液(PH5.5) 1ml

3%H2O2 2μl

(8) 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。

(9) 正常人血清和陽性對(duì)照血清。

器材

(1) 聚苯乙烯塑料板(簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板)40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。

(2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

(3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。

試驗(yàn)原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1. 蒸餾水。

2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

5. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

10. 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

11. 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

12. 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。