中文名 | 過(guò)氧根 | 外文名 | Peroxy radical |
---|---|---|---|
別????名 | 過(guò)氧離子 |
過(guò)氧化物易與水反應(yīng),并生成對(duì)應(yīng)堿與氧氣。
如2Na2O2 2H2O=4NaOH O2↑
與堿金屬同列的氫元素,其過(guò)氧根化合物H2O2不穩(wěn)定,易分解為水和氧氣。
如2H2O2==MnO2(催化劑)==2H2O O2↑
叉是得到的電子,sp雜化軌道是直線,p軌道是相碰的橢圓。2100433B
兩個(gè)氧原子以共價(jià)鍵結(jié)合的一個(gè)離子團(tuán),具有雙氧水(H2O2)的結(jié)構(gòu)。
堿金屬在燃燒的時(shí)候會(huì)產(chǎn)生過(guò)氧化物,如Na2O2。
其他過(guò)氧根化合物有:過(guò)氧化鎂(MgO2,易潮解為Mg(OH)2),過(guò)氧化鉀(K2O2,不穩(wěn)定,易被氧化成KO2)
辣根過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫的機(jī)理,求助大神
過(guò)氧化氫酶屬于過(guò)氧化物酶,是包含關(guān)系。過(guò)氧化物酶的范圍更大,其有過(guò)氧化氫酶的一切性質(zhì),和其沒(méi)有的性質(zhì)。過(guò)氧化氫酶:是催化過(guò)氧化氫分解成氧和水的酶,存在于細(xì)胞的過(guò)氧化物體內(nèi)。過(guò)氧化氫酶是過(guò)氧化物酶體的標(biāo)...
辣根過(guò)氧化物酶只能應(yīng)用于ELISA,對(duì)不?
辣根過(guò)氧化物酶用于ELISA的標(biāo)記用酶RP是一種分子量達(dá)44 000的糖蛋白,由無(wú)色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結(jié)合而成,中性糖和氨基糖約占18%。每一個(gè)HRP分子中含一個(gè)氯化血紅素IX作輔基,...
過(guò)氧化物酶(辣根過(guò)氧化酶,181U/mg)溶液(約0℃):取1.7mg過(guò)氧化物酶(Serva, Nr,31943)溶于5ml蒸餾水。辣根,別名:馬蘿卜,拉丁學(xué)名:Armoracia rusti...
格式:pdf
大小:9KB
頁(yè)數(shù): 1頁(yè)
評(píng)分: 4.6
雙氧水(過(guò)氧化氫)檢驗(yàn)方法 工業(yè)過(guò)氧化氫中過(guò)氧化氫含量的測(cè)定 工作原理: 在酸性介質(zhì)中, 過(guò)氧化氫與高錳酸鉀發(fā)生氧化還原反應(yīng), 根據(jù)高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定 溶液的消耗量,計(jì)算過(guò)氧化氫的含量。反應(yīng)是如下: KMnO 4+3H 2SO4+5H 2O2==K 2SO4+2MnO 4+5O2+8H 2O 儀器與試劑:棕色滴定管 滴瓶 硫酸溶液( 1+15):量取 25mLH 2SO4, 375mL 蒸餾水 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液( 0.1mol/L):準(zhǔn)確量取 0.79015g 高錳酸鉀試樣,溶解 并移入 250mL 容量瓶中,進(jìn)行標(biāo)定。 步驟: 1)用 10mL~25mL 的滴瓶以減量法對(duì)三種規(guī)格的產(chǎn)品稱量如下:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 27.5%~30%規(guī)格的產(chǎn)品,稱量約 0.15~0.20g 試樣; 35%規(guī)格產(chǎn)品,稱取約 0.12~0.16g 試樣, 精確至 0.0002g;置于一以加有 100mL 硫酸溶液
格式:pdf
大?。?span id="lvbfdhl" class="single-tag-height">9KB
頁(yè)數(shù): 3頁(yè)
評(píng)分: 4.7
針對(duì)現(xiàn)有固定床蒽醌加氫生產(chǎn)過(guò)氧化氫的工藝特點(diǎn),對(duì)氫化塔盤、氧化塔、氧化尾氣、后處理等進(jìn)行技術(shù)改造及優(yōu)化控制,保證裝置長(zhǎng)周期穩(wěn)定運(yùn)行,并取得了良好的節(jié)能效果。
過(guò)氧化物酶,酶學(xué)分類號(hào)為EC 1.11.1.7。
Donor+ H2O2--→Oxidized donor+2 H2O。
辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP) 比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以最常用。HRP廣泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多個(gè)同功酶組成,分子量為40,000,等電點(diǎn)為PH3~9,酶催化的最適PH因供氫體不同而稍有差異,但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm,一般以O(shè)D403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。高純度的酶RZ值應(yīng)在3.0左右(最高可達(dá)3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。
1) RZ>3 活性 >250u/mg, 主要應(yīng)用于免疫學(xué),是高純度的過(guò)氧化酶。采用特殊色譜純化技術(shù)以除去會(huì)影響免疫學(xué)反應(yīng)的同工酶B .
2) RZ>2 活性 >180u/mg ,主要應(yīng)用于臨床化學(xué),我們的客戶也有將這個(gè)規(guī)格的產(chǎn)品應(yīng)用于免疫學(xué)研究的。此時(shí),一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的分析方法就變得尤為重要。
3) RZ>1 活性 >100u/mg,主要應(yīng)用于血糖試紙和尿液分析試紙。
4) RZ>0.6 活性 >60u/mg ,主要應(yīng)用于尿液分析試紙。
辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)廣泛分布于植物中,因辣根中含量最高而得名,由無(wú)色酶蛋白和深棕色鐵卟啉(輔基)構(gòu)成一種糖蛋白(含糖18%)。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。
HRP分子量較小(40kDa),標(biāo)記物容易穿透入細(xì)胞內(nèi)部;作用底物為H2O2,以二氨基聯(lián)苯胺(DAB)為供氫體的反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的棕色吩嗪衍生物,可用普通光鏡觀察;在pH3.5~12范圍內(nèi)穩(wěn)定,對(duì)熱及有機(jī)溶劑的作用亦較穩(wěn)定,能耐受63℃加熱15min;用甲苯與石臘包埋切片處理或用純乙醇及10%甲醛水溶液固定作冰切片均不影響其活性;溶解性好,100mL緩沖鹽溶液中可溶解5gHRP,并可溶解于62%飽和度以下的硫酸銨溶液中,故常用硫酸銨分級(jí)沉淀法分離純化;氰化物、硫化物、氟化物、及疊氮化物等對(duì)HRP的活性有抑制作用,應(yīng)避免使用NaN3作為酶標(biāo)試劑的防腐劑,以防止失活。
凡能在HRP和H2O2存在時(shí)被酶催化H2O2反應(yīng)而和成有色產(chǎn)物的化合物(供氫體)都可以用顯色劑。供氫體的產(chǎn)物分不溶性和可溶性兩類。前者最常用的為3,3'二氨基聯(lián)苯胺(3,3'diaminobenzidine,DAB),適用于免疫組化法;反應(yīng)后的氧化型中間體迅速聚合,形成不溶性棕色吩嗪衍生物;這種多聚物還能還原和螯合四氧化餓,形成具有電子密度的產(chǎn)物,適用電鏡檢查;此外還有飽和聯(lián)苯胺溶液,氧化后產(chǎn)物呈黃褐色,多用于酶免疫擴(kuò)散的深沉線顯色。后者最常用的為鄰苯二胺(O-phenylene diamine,OPD),產(chǎn)物橙色,可溶性、敏感性高,最大吸收值為490nm,可用肉眼判別;易被濃酸終止反應(yīng),顏色可數(shù)小時(shí)不變,是ELISA中最常用的一種;但對(duì)光敏感,使用時(shí)要避光,并發(fā)現(xiàn)有致癌作用。
用HRP標(biāo)記抗體需借助交聯(lián)劑的作用,將酶連接在抗體分子上。常用的交聯(lián)劑為過(guò)碘酸鈉和戊二醛(glutaraldehyde,CHO-(CH2)3-CHO)。
HRP分子中與酶活性無(wú)關(guān)的糖基被過(guò)碘酸鈉氧化為醛基,再與抗體蛋白的氨基形成schiff堿。為了防止酶蛋白的氨基與醛基反應(yīng)發(fā)生自身偶聯(lián),在標(biāo)記前先用2,4-二硝基氟苯(DNFB)封閉酶蛋白中殘存的α-和ε-氨基。酶與抗體的結(jié)合反應(yīng)后,再加入硼氫化鈉(NaHB4)還原成穩(wěn)定的結(jié)合物。
[標(biāo)記步驟]
(1)取5mg HRP溶于0.5mL蒸餾水,加入1%2,4而二硝基氟苯(DNFB)無(wú)水乙醇溶液0.1mL,室溫(20℃±)下輕微攪拌作用1h。
(2)加入1mL 0.06mol/L NaIO4,室溫下避光輕攪30min,溶液呈黃綠色。
(3)加入1mL0.16mol/L乙二醇,室溫(20℃±)下輕攪作用1 h,終止氧化反應(yīng)。
(4)加入5mg抗體(Ig),裝入透析袋,置0.05mol/L,pH9.6碳酸鹽緩沖液(無(wú)水碳酸鈉1.5g,碳酸氫鈉2.93g,蒸餾水加至1 000 mL)1 000 mL中,4℃透析過(guò)夜,更換3次。
(5)取出透析袋中液體(約3 mL),加入5mg/mLNaHB4 0.2 mL 4℃ 2h或過(guò)夜。
(6)加50%飽和硫酸銨(NH4)2SO4溶液(硫酸銨850g,蒸餾水加至1 000 mL,以30%氨水調(diào)pH7.2)6 mL沉淀結(jié)合物,置4℃30min后,3 000r/min離心30min,取深沉(SPA不需要進(jìn)行此步)。
(7)將沉淀物溶于PBS(0.02M pH7.4)中,裝入透析袋,并以此緩沖液透析平衡6-12h,換液3次。
(8)在結(jié)合物內(nèi)加入BSA至蛋白濃度為10mg/ mL,或加等量60%甘油,測(cè)定工作效價(jià)后,小量分裝(或凍干,不需加甘油),低溫保存?zhèn)溆谩?/p>
戊二醛是一種常用的同型雙功能交聯(lián)劑,通過(guò)它的兩個(gè)醛基分別與HRP和抗體蛋白的氨基結(jié)合,形成HRP-戊二醛-Ab蛋白結(jié)合物。反應(yīng)可在4-40℃溫度范圍,pH6.0~8.0 的緩沖溶液中進(jìn)行,分為一步法和二步法,戊二醛一步法是將酶和待標(biāo)記抗體混合,同時(shí)加入戊二醛進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)。戊二醛二步法是將酶先與戊二醛作用,形成酶-戊二醛結(jié)合物,結(jié)過(guò)透析或?qū)游龀ノ唇Y(jié)合的戊二醛,然后再與抗體結(jié)合。
[標(biāo)記步驟]
(1)取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB將25%戊二醛稀釋為1.25%),室溫(20℃左右)反應(yīng)結(jié)合18h。
(2)用0.15mol/LNaCl平衡過(guò)的Sephadex G-50凝膠柱洗脫,除去游離的戊二醛,或用0.01mol/L,pH7.2PBS,4℃透析過(guò)夜。
(3)將5mg抗體IgG溶于1mL0.15mol/L NaCl,再與醛化HRP溶液(10mg/mL)混合。
(4)加入0.1mL 1mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液(調(diào)節(jié)pH至9.0~9.6),4℃,電磁攪拌下結(jié)合24h。
(5)加入0.1mL0.2mol/L賴氨酸(0.29g溶于10mL蒸餾水),4℃放置2h,以封閉殘留的醛基,終止反應(yīng)。
(6)裝入透析袋,以0.01mol/L、pH7.2 PBS,4℃透析過(guò)夜,或通過(guò)Sephadex G-200凝膠柱層析,用PBS洗脫,收集第1峰洗脫液,加入等量60%甘油,測(cè)工作效價(jià)后,小量分裝,4℃或-20℃保存。
雙氧水(過(guò)氧化氫),過(guò)氧化鈉,過(guò)氧化鈣等等。