目錄
第一章 引言
第二章 基本原理
第三章 具體操作
第四章 聚丙烯酰胺凝膠電泳在研究病毒蛋白質(zhì)和核酸方面的應(yīng)用
本書介紹了聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)在分離、分析和制備蛋白質(zhì)、核糖核酸等生物大分子方面的基本原理和具體操作。應(yīng)用部分著重介紹了蛋白質(zhì)、核糖核酸的分子量測定及該技術(shù)近年來在病毒學(xué)研究工作中的一些應(yīng)用。
本書可供臨床化學(xué)、食品化學(xué)、藥理學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)等有關(guān)科技人員和大專院校師生參考。
聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑甲叉...
(2)安裝電泳槽和鑲有長、短玻璃板的硅橡膠框時,位置要端正,均勻用力旋緊固定螺絲,以免緩沖液滲漏。樣品槽板梳齒應(yīng)平整光滑。
種類按離子特性分為:非離子型、陽離子型、陰離子型、兩性離子型?;拘畔?.聚丙烯酰胺為白色粉狀或顆粒型。2.不溶于大多數(shù)有機溶液。3.具有良好的絮凝性4.聚丙烯酰胺本身及其水解體沒有毒性,只有當給入量...
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實驗 7 聚丙烯酰胺凝膠電泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝膠電泳( polyacrylamide gel electrophoresis, 簡稱 PAGE),由稱盤狀電泳。 這種電泳是在區(qū)帶電泳的基礎(chǔ)上, 以孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠作為支持物, 采用電泳 基質(zhì)的不連續(xù)體系(即凝膠層的不連續(xù)性、緩沖液離子成分的不連續(xù)性、 pH 的不連續(xù)性及 電位梯度的不連續(xù)性) ,使樣品在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮成很薄的起始區(qū)帶(厚度為 10-2cm),然后再進行電泳分離。 圓盤電泳名稱來源即由于此法的原理是依靠基質(zhì)的不連續(xù)性( discontinuity ),湊巧在垂 直柱形凝膠上分散出的區(qū)帶也很象圓盤狀( discoid shape),取“不連續(xù)性”和“圓盤狀”的 英文字頭“ disc”。因此英文名稱為“ disc electrophoresis”,中文直譯為盤狀電泳。 儀器裝置:如 圖 A 所示,上下兩個
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評分: 4.6
一種以聚丙烯酰胺、苯酚、甲醛為主要原料制備的耐溫型凝膠堵水劑??疾旄鹘M分以不同比例配制時,對凝膠堵水劑各種性能的影響,確定凝膠堵水劑各組分的最佳基本配比。室內(nèi)研究結(jié)果表明,該堵水劑耐溫性好,黏度較高,成膠時間可調(diào),適應(yīng)溫度寬,封堵能力強,并且組分簡單,原料易得,可用于油田的調(diào)剖堵水作業(yè)。
聚丙烯酰胺凝膠電泳是什么,它具有哪些特點,經(jīng)過我們研究了解,對聚丙烯酰胺凝膠電泳有了進一步的認識。凝膠電泳顧名思義就是由丙烯酰胺在引發(fā)劑與加速劑形成的交聯(lián)的凝聚膠多孔聚合物,就是以聚丙烯酰胺凝膠作為介質(zhì)的電泳方法。
聚丙烯酰胺凝膠電泳具有很多優(yōu)勢特點,因為它是聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子,具有比較好的機械性質(zhì);凝膠在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對熱穩(wěn)定。凝膠無色透明,易觀察,可用檢測儀直接測定;丙烯酰胺是比較純的化合物,可以精制,減少污染等。
人們經(jīng)常把聚丙烯酰胺凝膠電泳與聚丙烯酰胺給誤認錯誤,其實兩者之間是有很大區(qū)別的,所以通過我們對凝膠電泳的簡要介紹,多多少少對聚丙烯酰胺凝膠電泳得到認識,以便用戶區(qū)分凝膠電泳與聚丙烯酰胺PAM。
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)或稱為活性電泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質(zhì)進行聚丙烯酰胺凝膠電泳,常用于酶的鑒定、同 工酶分析和提純。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離是依據(jù)其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用,因而可以得到較高的分辨率,尤其是在電泳分離后仍能保持蛋白質(zhì)和酶等生物大分子的生物活性,對于生物大分子的鑒定有重要意義,其方法是在凝膠上進行兩份相同樣品的電泳,電泳后將凝膠切成兩半,一半用于活性染色,對某個特定的生物大分子進行鑒定,另一半用于所有樣品的染色,以分析樣品中各種生物大分子的種類和含量。
非變性聚丙烯酰胺凝膠和變性SDS-PAGE電泳在操作上基本上是相同的,只是非變性聚丙烯酰胺凝膠的配制和電泳緩沖液中不能含有變性劑如SDS等。一般蛋白進行非變性凝膠電泳要先分清是堿性還是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候,要利用低pH凝膠系統(tǒng),分離酸性蛋白時候,要利用高pH凝膠系統(tǒng)。 酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的pH是8.8的緩沖系統(tǒng),蛋白會帶負電荷,蛋白會向陽極移動;而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進行,蛋白帶正電荷,這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳分離堿性蛋白。
聚丙烯酰胺凝膠電泳;polyacrylamide gel electrophoresis;PAGE
用聚丙烯酰胺為支持基質(zhì)的電泳程序。一般說來,實現(xiàn)聚丙烯酰胺凝膠電泳有兩種類型。⑴單向電泳:采用完整的蛋白質(zhì)或用十二烷基磺酸鈉(SDS)處理的蛋白質(zhì)的單向泳動,在有凝膠的平板上平行分離(過去也有用在玻管中的圓筒形棒狀凝膠進行電泳的,現(xiàn)已很少有人使用)。⑵雙向電泳:首先用天然蛋白質(zhì)進行分離,然后凝膠平板再用SDS處理,樣品便在第二向得到分離。第一次分離了各種各樣的蛋白質(zhì),因此第二向分離的是蛋白質(zhì)亞基。主要優(yōu)點是:⑴合成聚合物,故重復(fù)性良好;⑵分離能力好;⑶通過增減丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑(N,N′-亞甲基雙丙烯酰胺)的濃度,可以調(diào)節(jié)凝膠的孔徑大小;⑷操作簡便、時間短;⑸化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、機械性能好,柔軟;⑹在酸性或堿性緩沖液中均可進行電泳,而且可加入兩性電解質(zhì)進行等電點電泳,可用含電解質(zhì)表面活性劑(SDS)或非電解質(zhì)表面活性劑(Np40、Tritonx-100等)的凝膠進行電泳,亦可使兩者組合進行雙向電泳等等,使用范圍廣泛,利用價值日益提高;⑺由于染色技術(shù)的進步,可以進行定量,也可檢測出極微量的斑點(瓊脂糖電泳)。