膜片鉗

(1). 膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用

應(yīng)用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型，并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率，還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù)，膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。

利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門控性離子通道，膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)通過記錄煙堿誘發(fā)電流，可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動(dòng)的全過程，包括受體與其激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力，離子通道開放、關(guān)閉的動(dòng)力學(xué)特征及受體的失敏等活動(dòng)。使用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對(duì)煙堿受體激動(dòng)劑量效曲線的影響，來確定其作用的動(dòng)力學(xué)特征。然后根據(jù)分析拮抗劑對(duì)受體失敏的影響，拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點(diǎn)，可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點(diǎn)，即判斷拮抗劑是作用在受體的激動(dòng)劑識(shí)別位點(diǎn)，離子通道抑或是其它的變構(gòu)位點(diǎn)上。

(2).與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道

心肌細(xì)胞通過各種離子通道對(duì)膜電位和動(dòng)作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。國(guó)外學(xué)者在人類心肌細(xì)胞離子通道特性的研究中取得了許多進(jìn)展，使得心肌藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)由動(dòng)物細(xì)胞模型向人心肌細(xì)胞成為可能。

(3).對(duì)離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究

通過對(duì)各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究，了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機(jī)制。如對(duì)鈣離子在腦缺血神經(jīng)細(xì)胞損害中作用機(jī)制的研究表明，缺血性腦損害過程中，Ca2+ 介導(dǎo)現(xiàn)象起非常重要的作用，缺血缺氧使Ca2+通道開放，過多的Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載，導(dǎo)致神經(jīng)元及細(xì)胞膜損害，膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙，嚴(yán)重的可使神經(jīng)元壞死

(4).對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究

將膜片鉗技術(shù)與單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)欠磻?yīng)技術(shù)結(jié)合，在全細(xì)胞膜片鉗記錄下，將單細(xì)胞內(nèi)容物或整個(gè)細(xì)胞(包括細(xì)胞膜)吸入電極中，將細(xì)胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再經(jīng)常規(guī)PCR擴(kuò)增及待檢的特異mRNA的檢測(cè)，借此可對(duì)形態(tài)相似而電活動(dòng)不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或?yàn)閱渭?xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供標(biāo)本，為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實(shí)提供分子水平的解釋。國(guó)際上掌握此技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室較少，我國(guó)北京大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所于1994年在國(guó)內(nèi)率先開展。

(5).對(duì)藥物作用機(jī)制的研究

在通道電流記錄中，可分別于不同時(shí)間、不同部位(膜內(nèi)或膜外)施加各種濃度的藥物，研究它們對(duì)通道功能的可能影響，了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動(dòng)物生理功能的分子機(jī)理。這是目前膜片鉗技術(shù)應(yīng)用最廣泛的領(lǐng)域，既有對(duì)西藥藥物機(jī)制的探討，也廣泛用在重要藥理的研究上。如開麗等報(bào)道細(xì)胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測(cè)到人參二醇組皂苷可抑制正常和"缺血"誘導(dǎo)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開放，從而減少鈣內(nèi)流，對(duì)缺血細(xì)胞可能有保護(hù)作用。陳龍等報(bào)道采用細(xì)胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對(duì)培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細(xì)胞L-型鈣通道有阻滯作用。

(6). 在心血管藥理研究中的應(yīng)用

隨著膜片鉗技術(shù)在心血管方面的廣泛應(yīng)用，對(duì)血管疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)不僅得到了不斷更新，而且在其病因?qū)W與藥理學(xué)方面還形成了許多新的觀點(diǎn)。正如諾貝爾基金會(huì)在頒獎(jiǎng)時(shí)所說:"Neher和Sadmann的貢獻(xiàn)有利于了解不同疾病機(jī)理，為研制新的更為特效的藥物開辟了道路"。

(7). 創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選

在離子通道高通量篩選中主要是進(jìn)行樣品量大、篩選速度占優(yōu)勢(shì)、信息量要求不太高的初級(jí)篩選。最近幾年，分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎(chǔ)的兩大主流技術(shù)市場(chǎng)。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點(diǎn)與自動(dòng)化、微量化技術(shù)相結(jié)合，產(chǎn)生了自動(dòng)化膜片鉗等一些新技術(shù)。

(8). 與非損傷微測(cè)技術(shù)(NMT)的結(jié)合應(yīng)用

金屬離子作用于細(xì)胞膜行為的研究

細(xì)胞膜離子通道的性質(zhì)鑒定及其動(dòng)

力學(xué)研究

細(xì)胞分泌的研究

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究

分子生物學(xué)研究

膜片鉗放大器可以配 5101-01G(1 GΩ)探頭等三種探頭，適用于電流為±10 nA范圍內(nèi)的單通道測(cè)定和整體細(xì)胞研究，特點(diǎn)有:具有獨(dú)立的電壓和電流電路，4級(jí)低通Bessel濾波器。具有Zap功能和內(nèi)部檢測(cè)信號(hào)，三種電流鉗響應(yīng)速度增加了大型膜片鉗的穩(wěn)定性。

這個(gè)系統(tǒng)包含的PowerLab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)可以實(shí)時(shí)記錄各種神經(jīng)信號(hào)，單通道最高采樣速率可達(dá)200k/s。

19英寸適配機(jī)架

膜片鉗放大器

模擬細(xì)胞

Q系列電極夾持部件

ADInstruments還提供用于細(xì)胞外記錄、細(xì)胞內(nèi)記錄、雙電極電壓鉗、尤斯室電壓/電流鉗和刺激器等電生理設(shè)備