紫外可見吸收光譜法

1、紫外可見吸收光譜所對應的電磁波長較短，能量大，它反映了分子中價電子能級躍遷情況。主要應用于共軛體系（共軛烯烴和不飽和羰基化合物）及芳香族化合物的分析。

2、由于電子能級改變的同時，往往伴隨有振動能級的躍遷，所以電子光譜圖比較簡單，但峰形較寬。一般來說，利用紫外吸收光譜進行定性分析信號較少。

3、紫外可見吸收光譜常用于共軛體系的定量分析，靈敏度高，檢出限低。

紫外可見吸收光譜儀由光源、單色器、吸收池、檢測器以及數(shù)據(jù)處理及記錄（計算機）等部分組成

普通紫外可見光譜儀，主要由光源、單色器、樣品池(吸光池)、檢測器、記錄裝置組成．為得到全波長范圍(200～800-nm)的光，使用分立的雙光源，其中氘燈的波長為185～395 nm，鎢燈的為350～800nm．絕大多數(shù)儀器都通過一個動鏡實現(xiàn)光源之間的平滑切換，可以平滑地在全光譜范圍掃描．光源發(fā)出的光通過光孔調(diào)制成光束，然后進入單色器；單色器由色散棱鏡或衍射光柵組成，光束從單色器的色散原件發(fā)出后成為多組分不同波長的單色光，通過光柵的轉(zhuǎn)動分別將不同波長的單色光經(jīng)狹縫送入樣品池，然后進入檢測器(檢測器通常為光電管或光電倍增管)，最后由電子放大電路放大，從微安表或數(shù)字電壓表讀取吸光度，或驅(qū)動記錄設備，得到光譜圖。

紫外、可見光譜儀設計一般都盡量避免在光路中使用透鏡，主要使用反射鏡，以防止由儀器帶來的吸收誤差．當光路中不能避免使用透明元件時，應選擇對紫外、可見光均透明的材料(如樣品池和參考池均選用石英玻璃)．

儀器的發(fā)展主要集中在光電倍增管、檢測器和光柵的改進上，提高儀器的分辨率、準確性和掃描速度，最大限度地降低雜散光干擾．目前，大多數(shù)儀器都配置微機操作，軟件界面更貼近我們所要完成的分析工作．

分子的紫外可見吸收光譜法是基于分子內(nèi)電子躍遷產(chǎn)生的吸收光譜進行分析的一種常用的光譜分析法。分子在紫外-可見區(qū)的吸收與其電子結(jié)構緊密相關。紫外光譜的研究對象大多是具有共軛雙鍵結(jié)構的分子。如，膽甾酮（a）與異亞丙基丙酮（b）分子結(jié)構差異很大，但兩者具有相似的紫外吸收峰。兩分子中相同的O=C-C=C共軛結(jié)構是產(chǎn)生紫外吸收的關鍵基團。

紫外-可見以及近紅外光譜區(qū)域的詳細劃分如圖4.4所示。紫外-可見光區(qū)一般用波長（nm）表示。其研究對象大多在200-380 nm的近紫外光區(qū)和/或380-780 nm的可見光區(qū)有吸收。紫外-可見吸收測定的靈敏度取決于產(chǎn)生光吸收分子的摩爾吸光系數(shù)。該法儀器設備簡單,應用十分廣泛。如醫(yī)院的常規(guī)化驗中，95%的定量分析都用紫外-可見分光光度法。在化學研究中，如平衡常數(shù)的測定、求算主-客體結(jié)合常數(shù)等都離不開紫外-可見吸收光譜。

紫外可見吸收光譜的基本原理是利用在光的照射下待測樣品內(nèi)部的電子躍遷，電子躍遷類型有：

（1）σ→σ* 躍遷 指處于成鍵軌道上的σ電子吸收光子后被激發(fā)躍遷到σ*反鍵軌道

（2）n→σ* 躍遷 指分子中處于非鍵軌道上的n電子吸收能量后向σ*反鍵軌道的躍遷

（3）π→π* 躍遷 指不飽和鍵中的π電子吸收光波能量后躍遷到π*反鍵軌道。

（4）n→π* 躍遷 指分子中處于非鍵軌道上的n電子吸收能量后向π*反鍵軌道的躍遷。

電子躍遷類型不同，實際躍遷需要的能量不同：

σ→σ* ～150nm

n→σ* ～200nm

π→π* ～200nm

n→π* ～300nm

吸收能量的次序為：σ→σ*>n→σ*≥π→π*>n→π*

特殊的結(jié)構就會有特殊的電子躍遷，對應著不同的能量（波長），反映在紫外可見吸收光譜圖上就有一定位置一定強度的吸收峰，根據(jù)吸收峰的位置和強度就可以推知待測樣品的結(jié)構信息。

紫外可見吸收光譜法總述

物質(zhì)的紫外吸收光譜基本上是其分子中生色團及助色團的特征，而不是整個分子的特征。如果物質(zhì)組成的變化不影響生色團和助色團，就不會顯著地影響其吸收光譜，如甲苯和乙苯具有相同的紫外吸收光譜。另外，外界因素如溶劑的改變也會影響吸收光譜，在極性溶劑中某些化合物吸收光譜的精細結(jié)構會消失，成為一個寬帶。所以，只根據(jù)紫外光譜是不能完全確定物質(zhì)的分子結(jié)構，還必須與紅外吸收光譜、核磁共振波譜、質(zhì)譜以及其他化學、物理方法共同配合才能得出可靠的結(jié)論。

紫外可見吸收光譜法化合物的鑒定

利用紫外光譜可以推導有機化合物的分子骨架中是否含有共軛結(jié)構體系，如C=C－C=C、C=C－C=O、苯環(huán)等。利用紫外光譜鑒定有機化合物遠不如利用紅外光譜有效，因為很多化合物在紫外沒有吸收或者只有微弱的吸收，并且紫外光譜一般比較簡單，特征性不強。利用紫外光譜可以用來檢驗一些具有大的共軛體系或發(fā)色官能團的化合物，可以作為其他鑒定方法的補充。

（1）如果一個化合物在紫外區(qū)是透明的，則說明分子中不存在共軛體系，不含有醛基、酮基或溴和碘?？赡苁侵咀逄細浠衔铩?、腈、醇等不含雙鍵或環(huán)狀共軛體系的化合物。

（2）如果在210～250nm有強吸收，表示有K吸收帶，則可能含有兩個雙鍵的共軛體系，如共軛二烯或α，β-不飽和酮等。同樣在260，300，330nm處有高強度K吸收帶，在表示有三個、四個和五個共軛體系存在。

（3）如果在260～300nm有中強吸收（ε=200～1 000），則表示有B帶吸收，體系中可能有苯環(huán)存在。如果苯環(huán)上有共軛的生色基團存在時，則ε可以大于10 000。

（4）如果在250～300nm有弱吸收帶（R吸收帶），則可能含有簡單的非共軛并含有n電子的生色基團，如羰基等。

紫外可見吸收光譜法純度檢查

如果有機化合物在紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰，而雜質(zhì)在紫外區(qū)有較強的吸收，則可利用紫外光譜檢驗化合物的純度。對于異構體的確定，可以通過經(jīng)驗規(guī)則計算出λmax值，與實測值比較，即可證實化合物是哪種異構體。如: 乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇式互變異構

紫外可見吸收光譜法位阻作用的測定

由于位阻作用會影響共軛體系的共平面性質(zhì)，當組成共軛體系的生色基團近似處于同一平面，兩個生色基團具有較大的共振作用時，λmax不改變，εmax略為降低，空間位阻作用較小；當兩個生色基團具有部分共振作用，兩共振體系部分偏離共平面時，λmax和εmax略有降低；當連接兩生色基團的單鍵或雙鍵被扭曲得很厲害，以致兩生色基團基本未共軛，或具有極小共振作用或無共振作用，劇烈影響其UV光譜特征時，情況較為復雜化。在多數(shù)情況下，該化合物的紫外光譜特征近似等于它所含孤立生色基團光譜的“加合”。

紫外可見吸收光譜法氫鍵強度的測定

溶劑分子與溶質(zhì)分子締合生成氫鍵時，對溶質(zhì)分子的UV光譜有較大的影響。對于羰基化合物，根據(jù)在極性溶劑和非極性溶劑中R帶的差別，可以近似測定氫鍵的強度。溶劑分子與溶質(zhì)分子締合生成氫鍵時，對溶質(zhì)分子的UV光譜有較大的影響。對于羰基化合物，根據(jù)在極性溶劑和非極性溶劑中R帶的差別，可以近似測定氫鍵的強度。

紫外可見吸收光譜法定量分析

朗伯-比爾定律是紫外-可見吸收光譜法進行定量分析的理論基礎，它的數(shù)學表達式為: A = ε b c

影響紫外吸收光譜的因素有：1、共軛效應；2、超共軛效應；3、溶劑效應；4、溶劑pH值。

各種因素對吸收譜帶的影響表現(xiàn)為譜帶位移、譜帶強度的變化、譜帶精細結(jié)構的出現(xiàn)或消失等。譜帶位移包括藍移（或紫移，hypsochromic shift or blue shift))和紅移(bathochromic shift or red shift)。藍移（或紫移）指吸收峰向短波長移動，紅移指吸收峰向長波長移動。吸收峰強度變化包括增色效應(hyperchromic effect)和減色效應(hypochromic effect)。前者指吸收強度增加，后者指吸收強度減小。各種因素對吸收譜帶的影響結(jié)果總結(jié)于圖中。