超薄切片取材的基本要求

組織從生物活體取下以后，如果不立即進(jìn)行適當(dāng)處理，會(huì)由于細(xì)胞內(nèi)部各種酶的作用，出現(xiàn)細(xì)胞自溶現(xiàn)象。此外，還可能由于污染，微生物在組織內(nèi)繁殖使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)遭受破壞。因此，為了使細(xì)胞結(jié)構(gòu)盡可能保持生前狀態(tài)，必須做到快、小、準(zhǔn)、冷：

(1)．動(dòng)作迅速，組織從活體取下后應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi) (爭(zhēng)取在1分鐘內(nèi)) 投入2.5%戊二醛固定液。

(2)．所取組織的體積要小，一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長(zhǎng)條形。因

為固定劑的滲透能力較弱，組織塊如果太大，塊的內(nèi)部將不能得到良好的固定。

(3)．機(jī)械損傷要小，解剖器械應(yīng)鋒利，操作宜輕，避免牽拉、挫傷與擠壓。

(4)．操作最好在低溫(0℃～4℃)下進(jìn)行，以降低酶的活性，防止細(xì)胞自溶。

(5)．取材部位要準(zhǔn)確。

為了觀察生物體的微細(xì)結(jié)構(gòu)，電子顯微鏡所用的超薄切片， 需要經(jīng)過了解取材的基本要求，取材和制備超薄切片的過程， 即為透射電鏡 標(biāo)本（超薄切片）的制備 。

將取出的組織放在潔凈的蠟版上，滴一滴預(yù)冷的固定液，用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下并修小，然后用牙簽或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液，應(yīng)先用固定液洗幾遍，然后再切成小塊固定。

制備超薄切片的設(shè)備為超薄切片機(jī)，使用的刀為玻璃刀或鉆石刀。為了能切成薄片，包埋標(biāo)本的包埋劑一定要達(dá)到一定的硬度，通常是用樹脂聚合包埋。

方法與步驟：鋨酸和戊二醛固定樣品→丙酮逐級(jí)脫水→環(huán)氧樹脂包埋_→以熱膨脹或機(jī)械伸縮的方式切片_→重金屬（鈾，鉛）鹽染色．

制作細(xì)胞或組織切片的機(jī)器。用于光學(xué)顯微鏡的有旋轉(zhuǎn)式和滑走式切片器。用于電子顯微鏡的有超薄切片器，使用玻璃刀或鉆石刀制作超薄切片。材料的裝置有機(jī)械推進(jìn)式和熱膨脹式。用于冷凍切片法的有冷凍切片器、低溫恒溫器、冷凍超薄切片器。用于徒手切片的有圓筒切片器（cylinder microtome）。

提供半薄, 超薄切片和容易準(zhǔn)備，以及樣品表面光滑處理，為透射電鏡，掃描電鏡，原子力顯微鏡和光鏡檢驗(yàn)生物和工業(yè)樣品。