咔唑比色法

(1) 新鮮樣品稱取試樣30~50g，用小刀切成薄片，置于預(yù)先放有無水乙醇的500mL錐形瓶中。裝上回流冷凝器，在水浴上沸騰回流15min后，冷卻。用布氏漏斗過濾，殘?jiān)浦裂欣徶?，一邊慢慢磨碎，一邊滴?0%的熱乙醇，冷卻后再過濾，反復(fù)操作至濾液不呈糖的反應(yīng)(用苯酚一硫酸法檢驗(yàn))為止。殘?jiān)脽o水乙醇洗滌脫水，再用乙醚洗滌以除去脂類和色素，漏斗中殘?jiān)诳諝庵袚]發(fā)去乙醚。

(2) 干燥樣品 研細(xì)，過60目篩，取5~10g樣品于燒杯中，加入熱的70%乙醇，充分?jǐn)嚢枰蕴崛√穷?，過濾。反復(fù)操作至濾液不呈糖的反應(yīng)。殘?jiān)脽o水乙醇洗滌，再用乙醚洗滌，最后讓乙醚揮發(fā)掉。

(1) 水溶性果膠提取用150mL水將上述揮發(fā)至干的殘?jiān)迫?50ml燒杯中，加熱至沸并保持沸騰1h，隨時補(bǔ)足蒸發(fā)的水分，冷卻后移入250mL容量瓶中，加水定容，搖勻，過濾，棄去初濾液，收集濾液即為水溶性果膠提取液。

(2) 總果膠的提取用150mL加熱至沸的0.05mol/L鹽酸溶液把揮干的殘?jiān)迫?50mL錐形瓶中，裝上冷凝器，于沸水浴中加熱回流1h，冷卻后移入250mL容量瓶中，加甲基紅指示劑2滴，加0.5mol/L氫氧化鈉中和后，用水定容，搖勻，過濾，收集濾液即為總果膠提取液。

(3) 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作取8支50mL比色管，各加入12mL濃硫酸，置冰水浴中，邊冷卻邊緩緩依次加入濃度為0mg/L、10mgL/、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，充分混合后，再置冰水浴中冷卻。然后在沸水浴中準(zhǔn)確加熱10min，用流動水迅速冷卻到室溫，各加入0.15%咔唑試劑1mL，充分混合，置室溫下放置30min，以0號管為空白在530nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

(4) 測定取果膠提取液，用水稀釋到適當(dāng)濃度(含半乳糖醛酸10~70mg/L)。取2mL稀釋液于50mL比色管中，以下按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法操作，測定吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出半乳糖醛酸濃度(mg/L)。

計算公式如下:

式中X-樣品中果膠物質(zhì)(以半乳糖醛酸計)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%;

c-從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的半乳糖醛酸濃度，mg/L;

V-果膠提取液總體積，mL;

K-提取液稀釋倍數(shù);

m-樣品質(zhì)量，g。

(1) 糖分的存在對咔唑的呈色反應(yīng)影響較大，使結(jié)果偏高，故樣品處理時應(yīng)充分洗滌以除去糖分。

(2) 檢驗(yàn)糖分的苯酚一硫酸法:取檢液1mL，置于試管中，加入5%苯酚水溶液1mL，再加入硫酸5mL，混勻，如溶液呈褐色，證明檢液中含有糖分。

(3)硫酸的濃度對呈色反應(yīng)影響較大，半乳糖醛酸在低濃度的硫酸中與咔唑試劑的呈色度極低，甚至不顯色，只有在濃硫酸中才可使其顯色，且顏色深淺與濃硫酸濃度和純度有關(guān)。故在測定樣液和制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，應(yīng)使用同規(guī)格、同批號的濃硫酸，以保證其濃度、純度一致。

(4 )本法的測定結(jié)果以半乳糖醛酸表示，因不同來源的果膠中半乳糖醛酸的含量不同，如甜橙為77.7%，檸檬為94.2%，柑橘為96%，蘋果為72%~75%。若把結(jié)果換算為果膠的含量，可按上述關(guān)系計算換算系數(shù)。

分光光度計，恒溫水浴鍋

(1) 95%乙醇或無水乙醇。

(2) 70%乙醇。

(3) 乙醚。

(4) 0.05mol/L鹽酸溶液。

(5) 0.5mol/L氫氧化鈉溶液。

(6) 0.15%咔唑試劑

稱取化學(xué)純咔唑0.15g，溶解于精制乙醇中，并定容到100mL。咔唑溶解緩慢，需加以攪拌。

(7) 精制乙醇

取無水乙酵或95%乙醇1000mL，加入鋅粉4g，硫酸(1:1) 4mL，在水浴中回流10h，用全玻璃儀器蒸餾，餾出液每1000mL加鋅粉和氫氧化鉀各4g，重新蒸餾一次。

(8) 半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液

準(zhǔn)確稱取半乳糖醛酸100mg，溶于蒸餾水并定容到100mL，得濃度為1 mg/mL半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

(9) 半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)工作液

分別準(zhǔn)確吸取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液于8個100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，得一組濃度分別為0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)工作液。

(10) 濃硫酸優(yōu)級純。

(11) 甲基紅指示劑。

中文名稱: 3-溴咔唑

中文別名:3-溴咔唑;3-溴-9氫-咔唑

英文名稱: 3-Bromo-9H-carbazole

英文別名: 3-BROMO-9H-CARBAZOLE;2-bromo-9H-carbazole;3-BROMOCARBAZOLE

產(chǎn)品編號: YCY159

CAS號: 1592-95-6

分子式: C12H8BRN

分子量:246.1

蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。