擬南芥WRKY62轉(zhuǎn)錄因子在水楊酸拮抗茉莉酸信號(hào)通路中的功能研究概述

茉莉酸(JA)和茉莉酸甲酯(MeJA)作為與損傷相關(guān)的植物激素和信號(hào)分子，廣泛地存在于植物體中，外源應(yīng)用能夠激發(fā)防御植物基因的表達(dá)，誘導(dǎo)植物的化學(xué)防御，產(chǎn)生與機(jī)械損傷和昆蟲(chóng)取食相似的效果，大量研究表明， 用茉莉酸類(lèi)化合物處理植物可系統(tǒng)誘導(dǎo)蛋白酶抑制劑(PI)和多酚氧化酶(PPO)，從而影響植食動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，還能增加過(guò)氧化物酶、殼聚糖酶和脂氧合酶等防御蛋白的活性水平,導(dǎo)致生物堿和酚酸類(lèi)次生物質(zhì)的積累，增加并改變揮發(fā)性信號(hào)化合物的釋放,甚至形成防御結(jié)構(gòu),如毛狀體和樹(shù)脂導(dǎo)管。經(jīng)茉莉酸處理的植物提高了植食動(dòng)物的死亡率,變得更加吸引捕食性和寄生性天敵，揮發(fā)性化合物--茉莉酸甲酯可以從植物的氣孔進(jìn)入植物體內(nèi),在細(xì)胞質(zhì)中被酯酶水解為茉莉酸,實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)距離的信號(hào)傳導(dǎo)和植物間的交流,誘導(dǎo)鄰近植物產(chǎn)生誘導(dǎo)防御反應(yīng).茉莉酸和茉莉酸甲酯分別具有4種立體異構(gòu),其中具有活性的是順式結(jié)構(gòu),但順式結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,會(huì)差向異構(gòu)化為反式結(jié)構(gòu).茉莉酸的代謝物(Z)-茉莉酮(cis-Jasmone)具電生理活性,在植物誘導(dǎo)防御中起作用,并且在防御信號(hào)的作用上不同于茉莉酸和茉莉酸甲酯. 紅茶香氣成分之一。具有茉莉花濃甜香。在包種茶中茉莉酮酸酯占香氣組分層析峰面積1%，而茉莉花茶中只有痕量。

1. NF-κB信號(hào)

NF-kB(nuclear factor-kappa B)是1986年從B淋巴細(xì)胞的細(xì)胞核抽提物中找到的轉(zhuǎn)錄因子，它能與免疫球蛋白kappa輕鏈基因的增強(qiáng)子B序列GGGACTTTCC特異性結(jié)合，促進(jìn)κ輕鏈基因表達(dá)，故而得名。它是真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Rel家族成員之一，廣泛存在于各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中[1]。迄今為止，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)共發(fā)現(xiàn)5種NF-kB/Rel家族成員，它們分別是RelA(即p65)、RelB、C-Rel、p50/NF-kB1(即p50/RelA)和p52/NF-kB2。這些成員均有一個(gè)約300個(gè)氨基酸的Rel同源結(jié)構(gòu)域(Rel homology domain, RHD)。這個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)Rel蛋白形成同源或異源二聚體，該結(jié)構(gòu)域也是NF-kB與靶基因DNA序列的特異性結(jié)合區(qū)域。 細(xì)胞內(nèi)NF-kB的活化過(guò)程受到精細(xì)調(diào)控。通常情況下，在細(xì)胞質(zhì)中的NF-kB處于失活狀態(tài)，與抑制蛋白IkB(inhibitory protein of NF-kB)結(jié)合成三聚體復(fù)合物。當(dāng)出現(xiàn)TNF-a信號(hào)、炎癥因子以及LPS、紫外線(xiàn)等外界刺激時(shí)，細(xì)胞因子與細(xì)胞膜表面的TNF受體結(jié)合后，TNF受體發(fā)生多聚化并與細(xì)胞質(zhì)中TRADD分子發(fā)生相互作用。TRADD招募TRAF(TNFR-associated factor)和激酶RIP(receptor interacting protein)，由RIP將信號(hào)傳遞給IKK(IkB kinase)。在NF-kB信號(hào)通路中IKK扮演了非常重要的角色，盡管上游信號(hào)路徑的不同，但是最終都匯集到IKK。IKK由a、b和g三個(gè)亞基組成，作為激酶的IKK能使IkB的a亞基的Ser32和Ser36殘基和b亞基的Ser19和Ser23殘基磷酸化。IkB隨即從p50/p65/IkB異源三聚體中解離出來(lái)，經(jīng)泛素化修飾后通過(guò)蛋白酶體降解。于是，受到IkB抑制的NF-kB得以暴露其核定位序列(nuclear localization signals, NLS)，迅速?gòu)募?xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與核內(nèi)DNA上的特異序列相結(jié)合，從而啟動(dòng)或增強(qiáng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[2]。

2.JAK-STAT信號(hào)通路

1) JAK與STAT蛋白

JAK-STAT信號(hào)通路是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一條由細(xì)胞因子刺激的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等許多重要的生物學(xué)過(guò)程。與其它信號(hào)通路相比，這條信號(hào)通路的傳遞過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，它主要由三個(gè)成分組成，即酪氨酸激酶相關(guān)受體、酪氨酸激酶JAK和轉(zhuǎn)錄因子STAT。

2) JAK-STAT信號(hào)通路

與其它信號(hào)通路相比，JAK-STAT信號(hào)通路的傳遞過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單。信號(hào)傳遞過(guò)程如下:細(xì)胞因子與相應(yīng)的受體結(jié)合后引起受體分子的二聚化，這使得與受體偶聯(lián)的JAK激酶相互接近并通過(guò)交互的酪氨酸磷酸化作用而活化。JAK激活后催化受體上的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化修飾，繼而這些磷酸化的酪氨酸位點(diǎn)與周?chē)陌被嵝蛄行纬?quot;停泊位點(diǎn)"(docking site)，同時(shí)含有SH2結(jié)構(gòu)域的STAT蛋白被招募到這個(gè)"停泊位點(diǎn)"。最后，激酶JAK催化結(jié)合在受體上的STAT蛋白發(fā)生磷酸化修飾，活化的STAT蛋白以二聚體的形式進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與靶基因結(jié)合，調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。值得一提的是，一種JAK激酶可以參與多種細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，一種細(xì)胞因子的信號(hào)通路也可以激活多個(gè)JAK激酶，但細(xì)胞因子對(duì)激活的STAT分子卻具有一定的選擇性。例如IL-4激活STAT6，而IL-12卻特異性激活STAT4[3]。

3.Ras、PI(3)K和mTOR信號(hào)

隨著人類(lèi)基因組測(cè)序的完成，目前已發(fā)現(xiàn)了幾百種蛋白激酶。根據(jù)它們結(jié)構(gòu)上的相似性，這些激酶可分為多個(gè)蛋白家族，在細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、分化和凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。Ras、PI(3)K和mTOR就是一類(lèi)與細(xì)胞增殖緊密相關(guān)的蛋白激酶。真核細(xì)胞的正常生長(zhǎng)受到周?chē)h(huán)境所提供的養(yǎng)分的限制。Ras和PI(3)K信號(hào)通過(guò)調(diào)控下游分子mTOR，在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)方面起著關(guān)鍵作用。在絕大多數(shù)的人腫瘤細(xì)胞中，Ras和PI(3)K信號(hào)通路中的關(guān)鍵調(diào)控因子都發(fā)生了明顯的突變。究其原因，人們發(fā)現(xiàn)這條信號(hào)通路如果發(fā)生突變，就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)不再受到養(yǎng)分等環(huán)境條件的限制，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞癌變。值得注意的是，一些腫瘤抑制因子，如TSC1、TSC2和LKB1在營(yíng)養(yǎng)匱乏的條件下減弱了mTOR信號(hào)通路的強(qiáng)度。相應(yīng)地，TSC1、TSC2或者LKB1的失活突變，就會(huì)導(dǎo)致相似的癌癥癥狀，并具有共同的臨床表現(xiàn)。因此，這條確保細(xì)胞在環(huán)境適宜條件下發(fā)生增殖的信號(hào)通路，在被癌細(xì)胞利用后就可以使癌細(xì)胞在養(yǎng)料匱乏的條件下存活并生長(zhǎng)。在篩選激酶抑制劑的過(guò)程中，人們?cè)O(shè)計(jì)了一系列針對(duì)mTOR、PI(3)K、RTKs和Raf等激酶的藥物。在癌癥的分子機(jī)理研究中，盡管這條信號(hào)通路研究得最透徹，但這些激酶在細(xì)胞和生物體內(nèi)的生理功能遠(yuǎn)比我們想象的要復(fù)雜[4]。

4.Wnt信號(hào)

Wnt信號(hào)通路廣泛存在于無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中，是一類(lèi)在物種進(jìn)化過(guò)程中高度保守的信號(hào)通路。Wnt信號(hào)在動(dòng)物胚胎的早期發(fā)育、器官形成、組織再生和其它生理過(guò)程中，具有至關(guān)重要的作用。如果這條信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白發(fā)生突變，導(dǎo)致信號(hào)異常活化，就可能誘導(dǎo)癌癥的發(fā)生[5]。1982年，R. Nusse和H.E. Varmus在小鼠乳腺癌細(xì)胞中克隆得到第一個(gè)Wnt基因，最初它被命名為Int1(integration 1)。后來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)小鼠Int基因與果蠅的無(wú)翅基因wg(wingless)為同源基因，因而將兩者合稱(chēng)為Wnt。H.E. Varmus 本人也因他在癌癥研究中的杰出貢獻(xiàn)而獲得1989年的諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。Wnt是一類(lèi)分泌型糖蛋白，通過(guò)自分泌或旁分泌發(fā)揮作用。Wnt信號(hào)通路的主要成分包括:分泌蛋白Wnt家族、跨膜受體Frizzled家族、CK1、Deshevelled、GSK3、APC、Axin、β-Catenin、以及轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF家族。Wnt信號(hào)通路是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，目前認(rèn)為它包括三個(gè)分支:經(jīng)典Wnt信號(hào)通路，通過(guò)β-Catenin激活基因轉(zhuǎn)錄;Wnt/PCP通路(planner cell polarity pathway)，通過(guò)小G蛋白激活JNK(c-Jun N-terminal kinase)來(lái)調(diào)控細(xì)胞骨架重排;Wnt/Ca2+通路，通過(guò)釋放胞內(nèi)Ca2+來(lái)影響細(xì)胞粘連和相關(guān)基因表達(dá)。 一般提到Wnt信號(hào)通路主要指的是由β-Catenin介導(dǎo)的經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。

5. BMP信號(hào)通路

BMP(bone morphogenetic protein，骨形態(tài)發(fā)生蛋白)是TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，transforming growth factor-β)超家族中的重要成員[6]。通過(guò)調(diào)節(jié)一系列下游基因的活性，控制著諸如中胚層形成、神經(jīng)系統(tǒng)分化、牙齒和骨骼發(fā)育以及癌癥發(fā)生等許多重要的生物學(xué)過(guò)程。BMP信號(hào)的傳遞主要通過(guò)配體BMP與細(xì)胞膜上的絲氨酸/蘇氨酸激酶受體(BMP receptor, BMPR)特異性結(jié)合，形成配體受體二元復(fù)合物。同時(shí)，Ⅱ型受體(BMPR2)能夠活化I型受體(BMPR1)，并進(jìn)一步將信號(hào)傳遞給細(xì)胞內(nèi)的Smad分子。在BMP和TGF-β信號(hào)由細(xì)胞膜傳遞至細(xì)胞核的過(guò)程中，Smad蛋白起到了關(guān)鍵性的作用。活化的I型受體(BMPR1)進(jìn)一步磷酸化Smad蛋白(Smad1、Smad5和Smad8)，促使Smad分子從細(xì)胞膜受體上脫離下來(lái)，并在胞質(zhì)內(nèi)結(jié)合Smad4分子(common Smad，Co-Smad)后進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，Smad多元復(fù)合物在其它DNA結(jié)合蛋白的參與下作用于特異的靶基因，調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。

6. Ras2MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑

1) Ras上游通路

Ras能被復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)激活。首先,被磷酸化激活的受體,如PDGFR,EGFR直接結(jié)合生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白(Grb2), 這些受體也可以間接結(jié)合并磷酸化含有src同源區(qū)2(SH2) 結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)(例如Shc,Syp)后,再激活Grb2.另外,Grb2的src同源區(qū)3(SH3)結(jié)構(gòu)域與靶蛋白如mSos1, mSos2,C3G及發(fā)動(dòng)蛋白(dynamin)結(jié)合.C3G與連接蛋白 Crk的SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合后耦聯(lián)酪氨酸磷酸化而激活Ras. Crk也能結(jié)合mSos1激活Ras.Grb2與激活的受體結(jié)合促 進(jìn)鳥(niǎo)苷酸交換因子(Sos)蛋白定位在與Ras相鄰的細(xì)胞膜上.這樣,Sos與Ras形成復(fù)合體,GTP取代GDP與Ras結(jié)合后,Ras被激活,當(dāng)GTP水解成GDP后Ras失活.Ras具有內(nèi)在GTPase活性,它的活性可被RasGAPs調(diào)節(jié),因而 RasGAPs扮演Ras活性調(diào)節(jié)劑的角色.另外,Ras失活也受 到高度調(diào)節(jié).目前,有三種蛋白質(zhì)能水解GTP使Ras失活, 它們分別是P120GAP, neurofibromin和GAP1m,統(tǒng)稱(chēng)為RasGAPs[7].

2) Ras下游通路

目前，Ras/Raf通路是最明確的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.當(dāng)GTP取代GDP與Ras結(jié)合,Ras被激活后, 再激活絲蘇氨酸激酶級(jí)聯(lián)放大效應(yīng),招集細(xì)胞漿內(nèi)Raf1絲 蘇氨酸激酶至細(xì)胞膜上,Raf激酶磷酸化MAPK激酶 (MAPKK), MAPKK激活MAPK. MAPK被激活后,轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi),直接激活轉(zhuǎn)錄因子.另外,MAPK刺激Fos,Jun轉(zhuǎn)錄因子形成轉(zhuǎn)錄因子AP1,該因子與myc基因旁的特異 的DNA序列結(jié)合,從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄.myc基因產(chǎn)物也是轉(zhuǎn)錄 因子,它能激活其他基因.最終,這些信號(hào)集中起來(lái)誘導(dǎo)D 型Cyclin的表達(dá)和活性.D型Cyclin與Cyclin依賴(lài)性激酶 (如CDK4和CDK6)形成復(fù)合體,該復(fù)合體的形成促使細(xì)胞 從G1期進(jìn)入S期.因此,Ras/Raf通路在受體信號(hào)和G1期 進(jìn)展之間起著關(guān)鍵作用,然而, Ras/Raf通路不是調(diào)控G1 期進(jìn)展的惟一通路.Ras與Raf單獨(dú)結(jié)合不能促進(jìn)Raf激酶活性,同時(shí),Raf能被不依賴(lài)Ras的機(jī)制所激活(例如能被Src酪氨酸激酶和PKC所激活),MAPK也能被不依賴(lài)Ras機(jī)制(如通過(guò)調(diào)節(jié)整合素的活性)所激活.表明級(jí)聯(lián)反應(yīng)每一個(gè)信號(hào)蛋白質(zhì)都能被多個(gè)上游蛋白質(zhì)所激活,而它們也可能有另外的靶蛋白[8]。