he染色

易于被堿性或酸性染料著色的性質稱為嗜堿性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性(neutrophilia)。

組織內的蛋白質構成蛋白質的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網及透明軟骨基質等均被堿性染料染色，這些物質稱為嗜堿性。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸堿度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時，原來被堿性染料染色的物質則可變?yōu)槭人嵝?。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。

脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷的陽離子結合使胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明對比。伊紅是細胞漿的良好染料。

由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色后，細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍，如處理適宜，可使細胞核著清楚的深藍色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態(tài)結構特點均可顯示出來。

(1)二甲苯(Ⅰ) 15min

(2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min

(3)二甲苯:無水乙醇=1:1 2min

(4) 100%乙醇(Ⅰ) 5min

(5) 100%乙醇(Ⅱ) 5 min

(6) 80%乙醇 5min

(7) 蒸餾水 5 min

(8) 蘇木精液染色 5 min

(9) 水洗10 min 或流水沖洗5 min

(10) 1%鹽酸乙醇 30s

(11) 水洗 30 s

(12)蒸餾水過洗 5 s

(13) 0.5%伊紅液染色 1-3 min

(14) 蒸餾水稍洗 30 s

(15) 80%乙醇稍洗 30 s

(16) 95%乙醇(Ⅰ)1 min

(17) 95%乙醇() 1 min

(18) 無水乙醇 (Ⅰ)3 min

(19)無水乙醇(Ⅱ)3 min

(20)二甲苯(Ⅰ) 3 min

(21)二甲苯(Ⅱ) 3 min

(22)中性樹膠封固

(1)冰凍切片固定 10~30 s

(2)稍水洗 1~2 s

(3)蘇木精液染色(60℃) 30~60 s

(4)流水洗去蘇木精液 5~10 s

(5)1%鹽酸乙醇 1~3 s

(6)稍水洗 1~2 s

(7)促藍液返藍 5~10 s

(8)流水沖洗 15~30 s

(9)0.5%曙紅液染色 30~60 s

(10)蒸餾水稍洗 1~2 s

(11)80%乙醇 1~2 s

(12)95%乙醇 1~2 s

(13)無水乙醇 1~2 s

(14)石炭酸二甲苯 2~3 s

(15)二甲苯(Ⅰ) 2~3 s

(16)二甲苯(Ⅱ) 2~3 s

(17)中性樹膠封固。

注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無水乙醇。

染色結果:細胞核藍色，胞質、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一的紅色。

切片脫水透明 切片經HE染色后，要徹底脫水透明，才能用中性樹膠封蓋。如果脫水不徹底，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片1-2級無水乙醇脫水，也可使用石炭酸二甲苯進行脫水。石炭酸有較強脫水能力，但長時間可使切片脫色，因此要經過多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

組織學、胚胎學、病理學教學與科研。

A:0.5~1% 的伊紅酒精溶液:

稱取伊紅Y 0.5~1 g，加少量蒸餾水溶解后，再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過濾，將濾渣在烘箱中烤干后，以95%酒精(即工業(yè)酒精，如果不怕浪費，用無水乙醇配制也可)100毫升溶解。

B:蘇木素染液配方:(配制3000 ml，可按比列減少)

蘇木精6 g

無水乙醇100 ml

硫酸鋁鉀150 g

蒸餾水2000 ml

碘酸鈉1.2 g

冰醋酸 120 ml

甘油 900 ml

配制方法:將蘇木素溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水，溶解后將甘油傾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸鈉。

C:1%鹽酸酒精分化液:將1毫升濃鹽酸加入99毫升70%酒精中即可。

在56只成年新西蘭兔的膝關節(jié)滑車處造成直徑3毫米的全層關節(jié)軟骨缺損模型。動物右膝植入硅橡膠，設為實驗組;左膝行同樣手術，造成全層關節(jié)軟骨缺損后不植入硅橡膠，為自身對照組。術后4周、12周、24周和48周擇期處死動物。取腦、心、肝、腎組織，切片并行HE染色。拍膝關節(jié)側位x片，檢查關節(jié)軟骨內硅橡膠的固定情況。在進行大體觀察后，取動物的雙膝，進行組織學、免疫組織化學檢查和分子生物學檢查。膝關節(jié)的組織學檢查包括股骨滑車處關節(jié)軟骨和與缺損相對應處髕骨關節(jié)軟骨的HE染色、甲苯胺藍染色和滑膜組織的HE染色。免疫組織化學檢查包括對股骨滑車關節(jié)軟骨的組織學切片進行I型膠原、II型膠原和III型膠原單克隆抗體的免疫組織化學檢查。分子生物學檢查包括對股骨滑車關節(jié)軟骨的組織學切片進行I型、II型和III型前膠原mRNA的原位雜交檢查。