he染色

易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性(neutrophilia)。

組織內(nèi)的蛋白質(zhì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度，pH值升高時(shí)，則原來(lái)被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時(shí)，原來(lái)被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說(shuō)染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。

脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。

由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后，細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán)，如處理適宜，可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。

(1)二甲苯(Ⅰ) 15min

(2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min

(3)二甲苯:無(wú)水乙醇=1:1 2min

(4) 100%乙醇(Ⅰ) 5min

(5) 100%乙醇(Ⅱ) 5 min

(6) 80%乙醇 5min

(7) 蒸餾水 5 min

(8) 蘇木精液染色 5 min

(9) 水洗10 min 或流水沖洗5 min

(10) 1%鹽酸乙醇 30s

(11) 水洗 30 s

(12)蒸餾水過(guò)洗 5 s

(13) 0.5%伊紅液染色 1-3 min

(14) 蒸餾水稍洗 30 s

(15) 80%乙醇稍洗 30 s

(16) 95%乙醇(Ⅰ)1 min

(17) 95%乙醇() 1 min

(18) 無(wú)水乙醇 (Ⅰ)3 min

(19)無(wú)水乙醇(Ⅱ)3 min

(20)二甲苯(Ⅰ) 3 min

(21)二甲苯(Ⅱ) 3 min

(22)中性樹(shù)膠封固

(1)冰凍切片固定 10~30 s

(2)稍水洗 1~2 s

(3)蘇木精液染色(60℃) 30~60 s

(4)流水洗去蘇木精液 5~10 s

(5)1%鹽酸乙醇 1~3 s

(6)稍水洗 1~2 s

(7)促藍(lán)液返藍(lán) 5~10 s

(8)流水沖洗 15~30 s

(9)0.5%曙紅液染色 30~60 s

(10)蒸餾水稍洗 1~2 s

(11)80%乙醇 1~2 s

(12)95%乙醇 1~2 s

(13)無(wú)水乙醇 1~2 s

(14)石炭酸二甲苯 2~3 s

(15)二甲苯(Ⅰ) 2~3 s

(16)二甲苯(Ⅱ) 2~3 s

(17)中性樹(shù)膠封固。

注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無(wú)水乙醇。

染色結(jié)果:細(xì)胞核藍(lán)色，胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維和紅細(xì)胞呈深淺不一的紅色。

切片脫水透明 切片經(jīng)HE染色后，要徹底脫水透明，才能用中性樹(shù)膠封蓋。如果脫水不徹底，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片1-2級(jí)無(wú)水乙醇脫水，也可使用石炭酸二甲苯進(jìn)行脫水。石炭酸有較強(qiáng)脫水能力，但長(zhǎng)時(shí)間可使切片脫色，因此要經(jīng)過(guò)多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研。

A:0.5~1% 的伊紅酒精溶液:

稱取伊紅Y 0.5~1 g，加少量蒸餾水溶解后，再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過(guò)濾，將濾渣在烘箱中烤干后，以95%酒精(即工業(yè)酒精，如果不怕浪費(fèi)，用無(wú)水乙醇配制也可)100毫升溶解。

B:蘇木素染液配方:(配制3000 ml，可按比列減少)

蘇木精6 g

無(wú)水乙醇100 ml

硫酸鋁鉀150 g

蒸餾水2000 ml

碘酸鈉1.2 g

冰醋酸 120 ml

甘油 900 ml

配制方法:將蘇木素溶于無(wú)水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水，溶解后將甘油傾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸鈉。

C:1%鹽酸酒精分化液:將1毫升濃鹽酸加入99毫升70%酒精中即可。

在56只成年新西蘭兔的膝關(guān)節(jié)滑車處造成直徑3毫米的全層關(guān)節(jié)軟骨缺損模型。動(dòng)物右膝植入硅橡膠，設(shè)為實(shí)驗(yàn)組;左膝行同樣手術(shù)，造成全層關(guān)節(jié)軟骨缺損后不植入硅橡膠，為自身對(duì)照組。術(shù)后4周、12周、24周和48周擇期處死動(dòng)物。取腦、心、肝、腎組織，切片并行HE染色。拍膝關(guān)節(jié)側(cè)位x片，檢查關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)硅橡膠的固定情況。在進(jìn)行大體觀察后，取動(dòng)物的雙膝，進(jìn)行組織學(xué)、免疫組織化學(xué)檢查和分子生物學(xué)檢查。膝關(guān)節(jié)的組織學(xué)檢查包括股骨滑車處關(guān)節(jié)軟骨和與缺損相對(duì)應(yīng)處髕骨關(guān)節(jié)軟骨的HE染色、甲苯胺藍(lán)染色和滑膜組織的HE染色。免疫組織化學(xué)檢查包括對(duì)股骨滑車關(guān)節(jié)軟骨的組織學(xué)切片進(jìn)行I型膠原、II型膠原和III型膠原單克隆抗體的免疫組織化學(xué)檢查。分子生物學(xué)檢查包括對(duì)股骨滑車關(guān)節(jié)軟骨的組織學(xué)切片進(jìn)行I型、II型和III型前膠原mRNA的原位雜交檢查。