梔子苷分析方法

方法名稱: 萬氏牛黃清心丸-梔子苷-高效液相色譜法

應(yīng)用范圍: 本方法采用高效液相色譜法測定萬氏牛黃清心丸中梔子苷的含量。

本方法適用于中成藥萬氏牛黃清心丸。

方法原理: 供試品加甲醇超聲，濾過，用高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長238nm處檢測梔子苷的吸收值，計(jì)算其含量。

試劑: 1. 甲醇(色譜純)

2. 乙腈(色譜純)

3.水為重蒸水

4.梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)

儀器設(shè)備: 1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑，Kromasil C18(250×4.6mm，5um)，理論板數(shù)按梔子苷計(jì)應(yīng)符合規(guī)定。

1.3可變波長紫外檢測器

1.4 色譜工作站

1.5 超聲發(fā)生器

2 色譜條件

2.1 流動(dòng)相:甲醇+乙腈=10+90

2.2流速:1.0ml/min

2.3檢測波長:238nm

2.4 柱溫:室溫

試樣制備: 1. 對照品溶液的制備

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含0.298mg的溶液，即得對照品溶液。精密量取梔子苷對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置于5ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2. 供試品溶液的制備

取本品10g，研細(xì)，過20目篩，精密稱取約1.2g，置于50mL具塞錐形瓶中，加甲醇25mL，密塞，稱定重量。超聲處理20min，放冷至室溫，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻。精密量取溶液10mL分別置于25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得供試品溶液。

操作步驟: 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取20ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為:y=494747X-1511.3，r=0. 9997(n=5)，線性范圍為0.596-2.980mg。

2. 供試品的測定

精密吸取供試品溶液20μL注入高效液相色譜儀測定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算梔子苷的含量。

注:"精密稱取"系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。"精密量取"系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

參考文獻(xiàn): 盧興紅，張?zhí)m桐，反相高效液相色譜法測定梔子及其制劑中梔子苷的含量，中國藥房，2003，14(12):748~750。

■菌落總數(shù)按GB/4789.2-1994。

■大腸菌群按GB/4789.3-1994。

■霉菌和酵母按GB/4789.15-1994。

■致病菌按GB4789.4~5、10~11

IUPAC Name:methyl (1S)-7-(hydroxymethyl)-1-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-1,4a,5,7a-tetrahydrocyclopenta[c]pyran-4-carboxylate.

CAS號:24512-63-8

分子式:C17H24O10

分子量:388.3664

密度:1.49g/cm3

沸點(diǎn):622.2°C at 760 mmHg

閃點(diǎn):224°C

蒸汽壓:4.37E-18mmHg at 25°C

口感與氣味:無味

規(guī)格:10%-98%

顏色:本品低含量為棕黃色，高含量為白色，用藥時(shí)需注意。

溶解性:易溶于水，溶于乙醇，不溶于石油醚。

性狀:環(huán)烯醚萜苷類化合物，對α-萘酚、羥肟酸、三氯化鐵呈正反應(yīng)。白色、類白色或淺黃色結(jié)晶。

藥理作用:梔子苷具有緩瀉、鎮(zhèn)痛、利膽、抗炎、治療軟組織損傷以及抑制胃液分泌和降低胰淀粉酶等作用。

梔子來源于茜草科Rubiaceae植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)。梔子中含有40余種生理活性物質(zhì), 其中為國內(nèi)外所公認(rèn)的中藥梔子有效成分為環(huán)烯醚萜類物質(zhì)。梔子所含的環(huán)烯醚萜類物質(zhì)包括梔子苷、京尼平苷、羥異梔子苷、梔子苷酸等,其中活性成分最高的是梔子苷和京尼平苷。梔子苷又是生產(chǎn)梔子藍(lán)、梔子紅、梔子紫的中間體和生藥品的有效單體。因此, 對梔子苷的分離、純化、結(jié)晶和含量測定成為對梔子深度開發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)。目前,對梔子苷的分離可以與α - 藏花素的分離同步進(jìn)行。較為成熟的方法是采用大孔樹脂吸附解吸的技術(shù)。選用的樹脂多為弱極性和無極性, 如HP20、XAD22、HPD2100、X25 、NKA等等。文獻(xiàn)報(bào)道梔子苷的提純方法主要有: 鉛鹽沉淀法、活性炭除雜法、硅膠吸附法等。通過比較研究得出的初步結(jié)論是, 上述方法作為研究尚可,但無法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。其主要問題在于: 工藝復(fù)雜、物耗過大、收得率低, 而且大量使用有毒有害的試劑,如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮、鉛鹽等。不符合食品、藥品的生產(chǎn)規(guī)范。而采用柱層析法則完全可以達(dá)到梔子苷純化的目的。選用安全、無毒、合適的固定相和流動(dòng)相, 在一定的吸附量、溫度、pH、流速、流量等條件下, 可以有效地將梔子苷的含量由50%純化到95%左右, 為梔子苷的結(jié)晶創(chuàng)造必要的條件。梔子苷含量的測定方法有薄層紫外法 、薄層掃描法、高效液相色譜法等,薄層紫外法和薄層掃描法準(zhǔn)確度不高, 高效液相色譜法是對梔子苷準(zhǔn)確、快速的定量測定方法,為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定。