od600

為什么需要測量OD600 OD值的名詞解釋與測量方法的實現(xiàn)

OD600在行業(yè)中的應(yīng)用

細(xì)菌細(xì)胞密度(OD600)測量時的注意事項

它的一個重要應(yīng)用，就是利用細(xì)菌的吸光來測量細(xì)菌培養(yǎng)液的濃度，從而估計細(xì)菌的生長情況，所以通常用來指菌體細(xì)胞密度。 比如，測量細(xì)菌培養(yǎng)液在600nm處的吸光值，得到的OD600的數(shù)值如果在0.6-0.8之間，表明細(xì)菌處于旺盛生長的對數(shù)生長期，OD600>3表明細(xì)菌已經(jīng)飽和等。細(xì)菌的生長情況,可以通過測OD600來監(jiān)測。細(xì)菌的生長比較好的時期是在OD600為1時,此時可以進(jìn)行轉(zhuǎn)代等研究.在細(xì)菌的培養(yǎng)中,OD600超過0.8就要稀釋培養(yǎng)液。

實驗室確定細(xì)菌生長密度和生長期，多根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細(xì)菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗，需要采用分光光度計準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液，之后定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。

2、OD值的名詞解釋與測量方法的實現(xiàn)

2.1 OD值名詞定義:OD是optical density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，是檢測方法里的專有名詞，檢測單位用OD值表示，1OD=log10(1/trans)，其中trans為檢測物的透光率T值。光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。

2.2 測量方法的實現(xiàn):知道的測量原理就是用分光光度計來實現(xiàn)，包括可見和紫外分光光度計都可以，因為波長是在600nm，市面上所有的分光光度計都可以滿足要求，但根據(jù)實驗者對測量數(shù)據(jù)的精度和準(zhǔn)確度的要求可以選擇不同檔次的光度計來實現(xiàn)。也有部分廠家的光度計直接支持OD600，例如天美的UV1100。如果是普通的分光光度計我們也可以實現(xiàn)OD600的測定，

第一步在儀器的光度計模式中，先把波長走到600nm;

第二步放入我們的空白樣品，進(jìn)行調(diào)零操作;

第三步放入樣品直接顯示樣品的T值(透過率值)，之后帶入OD值與T值的換算公式中可以得到OD600。個人感覺以后光度計可以直接增加測定OD值的功能，簡單的辦法就是在測量模式中直接加入OD選項，只需要簡單的編程就可以。

分光光度計要測量的樣品必須是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的話就要搖勻。為了保證正確操作，必須針對每種微生物和每臺儀器用顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，做出校正曲線。實驗中偶爾會出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負(fù)值，原因是采用了顯色的培養(yǎng)基，即細(xì)菌培養(yǎng)一段時間后，與培養(yǎng)基反應(yīng)，發(fā)生變色反應(yīng)。另外，需要注意的是，測試的樣品不能離心，保持細(xì)菌懸浮狀態(tài)。注意，一般來說樣品的吸光度值在0.1-1.5Abs之間可以保證儀器的準(zhǔn)度和測量結(jié)果的線性關(guān)系。對于濃度過度的樣品建議稀釋后再進(jìn)行測定。

分光光度計的重要配件-- 比色杯

比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據(jù)不同的測量體積，有比色杯和毛細(xì)比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不適合比色法測定。因為反應(yīng)中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色，所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內(nèi)測試樣品。

由于另外測試的樣品量不同，所以一般分光光度計廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。市場已經(jīng)存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質(zhì)定量，亦可用于蛋白比色法測定的塑料杯，樣品用量僅需50μl，比色杯單個無菌包裝，可以回收樣品。如Eppendorf UVette®塑料比色杯，比色杯市場上一個革新。隨著生命科學(xué)以及相關(guān)學(xué)科發(fā)展，對此類科學(xué)的實驗研究提出更高的要求，分光光度計將是分子生物學(xué)實驗室不可缺少的儀器，也成為微生物、食品、制藥等相關(guān)實驗室的必備設(shè)備之一。