封片

機器膠帶封片機不用樹膠，只用少量二甲苯即可封片。使 用方便，切片診斷后即可歸檔，不會因樹膠不干造成粘片等。使用封片機時，首先檢查二甲苯瓶，并檢查滴 液分注量，檢查膠帶可用量、選擇膠帶長短規(guī)格，檢查接片筐是否安裝到位。工作時開通電源，并打開過濾網(wǎng)開關(guān)。工作完成后，關(guān)閉2個電源，擦拭機器。

手工封片應(yīng)注意以下七點。

(1)所用樹膠濃度要適中，以一般速度滴 下并恰能成珠既可。太稀時易溢出玻片，當二甲苯揮發(fā)后，組織切片就會收縮產(chǎn)生膠不勻并出現(xiàn)大片氣泡。太濃時，滴在玻片上樹膠不易散開，易產(chǎn)生氣泡，難以驅(qū)除，并影響折光率。

(2)樹膠用量多少應(yīng)根據(jù)組織大小、厚薄而定。

(3)應(yīng)迅速敏捷滴膠。

(4)封片時，切片上應(yīng)保留適當?shù)亩妆?，以防干封，產(chǎn)生氣泡。

(5)為防止氣泡，封片時，樹膠不宜攪動。

(6)如遇有小氣泡時可用鑷子輕壓蓋玻片，排除氣泡。

(7)封片時，若離面部較近，鼻、口呼出的氣體會有水分造成切片云霧狀甚至模糊不清，需引起注意。

機器蓋玻片封片機采用模擬人工手法來完成封片工作。使用機器 封片，封片效率高、質(zhì)量好，同時可減少封片對技術(shù)人員身體的傷害。其操作步驟為如下。

(1)接通電源，打開開關(guān)，機器進行白檢后，指示燈變綠即可工作。

(2)將染色完成的染色籃準確的放人封片機內(nèi)。

(3)按動開始鍵，封片機進入工作狀態(tài)。

(4)封片結(jié)束后報警，即可取出封好的切片。 機器蓋玻片封片機的蓋玻片采用24×40、24×50、24×60等規(guī)格的蓋片(目前國產(chǎn)免洗蓋玻片已代替進口，使用效果良好)。

機器封片工作站:

將常規(guī)染色機蓋片機組合起來就可成為一個集成式的全自動化染色/蓋片工作站，一起創(chuàng)造出高度靈活的系統(tǒng)，帶來無需守候的便利。在完成染色處理后，創(chuàng)新性的機械臂可將載玻片架從染色機轉(zhuǎn)送到蓋片機中。不再需要在染色機和蓋片機之間手動操作載玻片架。

使用機器封片有以下五個優(yōu)勢:

1 真正實現(xiàn)無人操作:可以單獨運行或與染色機配套使用，真正實現(xiàn)無人操作。

2 每小時蓋片400張:使用標準載玻片和不同尺寸的蓋玻片，每小時蓋片400張，提高實驗室的生產(chǎn)力和工作效率。

3 開放式系統(tǒng)設(shè)計:可以使用各種封固劑，實現(xiàn)高度的靈活性。

4 更多的靈活性:能同時滿足不同應(yīng)用，如組織學(xué)和細胞學(xué)應(yīng)用，呈現(xiàn)更多的靈活性。

5 廢氣排放系統(tǒng):集成的廢氣排放系統(tǒng)帶活性炭濾網(wǎng)，降低空氣中二甲苯或二甲苯替代品的濃度，減少實驗室工作人員暴露于有害廢氣中。

Vector公司提供多種水溶性和脂溶性封片劑,適合于不同底物。此外,Vector公司還提供多種房防止熒光萃滅的封片劑(染色片可保存1-2個月)和帶有染色細胞核(DNA)的封片劑(用于ISH或襯染DNA的實驗等)。

貨號:H-1000

包裝:10ml/瓶

價格:電議

H-1000, Mounting Medium, 400張/10ml 防熒光萃滅效果尤好,長期保存。 FITC,Texas Red,Rhodamine,AMCN等。

H-1200 ,Mounting Medium with DAPI,含DAPI 400張/10ml ,防熒光萃滅;含DAPI,可襯染細胞核;用于ISH或襯染DNA的實驗。 PE,FITC等。

H-1300 ,含PI 400張/10ml ,防熒光萃滅;含PI,可襯染細胞核;用于ISH或襯染DNA的實驗。 FITC等。

H-1400, HardSet Mounting Medium, 400張/10ml 凝固性;防熒光萃滅;適于油鏡觀察。 FITC,Texas Red,Rhodamine等。

H-1500 HardSet Mounting Medium with DAPI, 400張/10ml 凝固性;防熒光萃滅;含DAPI,可襯染細胞核,用于ISH或襯染DNA的實驗;適于油鏡觀察。 FITC,Texas Red,含DAPI Rhodamine等。

H-5000 ,Permanent Mounting Medium ,240張/60ml 非水溶性,無毒、無味;清晰;和底物BCIP/NBT聯(lián)用,可將結(jié)晶減至最小。長期保存。 HRP和AP的底物。

H-5501, AQ Aqueous Mounting Medium ,240張/60ml 水溶性,適于反應(yīng)產(chǎn)物為酒精或其它有機溶劑溶性的底物。 大多數(shù)HRP和AP的底物如AEC,DAB, BCIP/NBT, Vector SG.

1工作原理2結(jié)構(gòu)特點3性能

1.工作原理

依托端面密封的原理，將多個閥門緊密地集成在一個閥體上，呈平面圓周布置。當旋轉(zhuǎn)動片時，即可實現(xiàn)同時關(guān)閉若干閥門，同時開啟另外若干閥門的功能。A.結(jié)構(gòu)原理采用一定面積的高平面度兩平面的貼合，能起到密封阻流的作用。潤新閥在閥體內(nèi)徑向固定一個高平面度的定密封片，通過手柄或電機帶動高硬度、高平面度的陶瓷動密封片與定密封片貼合旋轉(zhuǎn)，由于動、定密封片各自帶有不同的盲孔與通孔，當動片停留在定片的不同位置時，即可產(chǎn)生不同的流體通道，從而實現(xiàn)制水、反沖洗、吸鹽+慢洗、向鹽箱補水、正沖洗等五種功能。(過濾閥實現(xiàn)制水、反沖洗、正沖洗三種功能)。B.自動閥控制原理信號→程序控制器→傳動裝置→動閥片→定位裝置→程序控制器系統(tǒng)采用微電腦控制，以時間、流量或者出水水質(zhì)等為信號啟動程序，通過傳動裝置帶動動閥片旋轉(zhuǎn)，到達相應(yīng)的位置后，通過定位裝置將信號傳送至微電腦，停止動作;當下一信號滿足設(shè)定要求時，再次啟動轉(zhuǎn)向下一工位。如此周期循環(huán)，在動閥片旋轉(zhuǎn)一周的過程中，實現(xiàn)所需的各種功能。2.結(jié)構(gòu)特點1.端面密封結(jié)構(gòu)A.動片采用陶瓷B.定片采用高強度合成材料C.對各種軟化閥，采用部分平衡結(jié)構(gòu)，以防止由于水壓的升高而導(dǎo)致密封面扭矩加大。2.可帶壓操作潤新閥因采用兩片高平面度的密封片相互貼合旋轉(zhuǎn)密封，在各個功位相互切換時，可直接帶壓操作。3.無原水旁通控制閥在再生或清洗時自動阻斷軟水器或過濾器的出水管路，阻止未處理的原水進入系統(tǒng)。4.裝配簡單閥門主要由閥體、動定密封片、撥叉、壓緊螺塞等組成;復(fù)雜零件-閥體采用一次成型，加工環(huán)節(jié)少，尺寸穩(wěn)定性高。直接將每個工作位置的定位固定在閥體上，定位精度更高。安裝時，每個零部件都有限位，不會裝錯。5.有多種規(guī)格射流器射流器的吸鹽量與出口總流量之比在25%~35%之間。每種罐體都有一種射流器與之相配。3.性能潤新閥的耐雜質(zhì)能力更強，反洗流量大，顯示方式有LED及LCD兩種，再生方式有順流再生、逆流再生供選擇。潤新閥的出廠產(chǎn)品100%進行0.1MPa、0.6MPa氣壓及水壓測試且通過美國NSF認證，具有嚴格的可靠性。

石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與貼片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數(shù)日，但標本可以長期保存使用，為永久性顯微玻片標本。

應(yīng)根據(jù)要求選取材料來源及部位。例如植物細胞有絲分裂多選取洋蔥根尖，細胞分裂快又便于切取;豬的肝小葉邊界清晰明確;耳蝸以豚鼠的內(nèi)耳易于定位和剝離。材料必須新鮮，擱置時間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性，導(dǎo)致細胞自溶及細菌的滋生，而不能反映組織活體時的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

用適當?shù)幕瘜W(xué)藥液--固定液浸漬切成小塊的新鮮材料，迅速凝固或沉淀細胞和組織中的物質(zhì)成分、終止細胞的一切代謝過程、防止細胞自溶或組織變化，盡可能保持其活體時的結(jié)構(gòu)。固定能使組織硬化，有利于切片的進行，而且也有媒浸作用，有利于組織著色。固定液的種類很多，其對組織的硬化收縮程度以及組織內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等物質(zhì)的作用各不相同。例如純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般組織，但溶解肝糖和色素。固定液可分為單一固定液及混合固定液。前者有甲醛(乙醛、福爾馬林)、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、鋨酸(四氧化鋨)、重鉻酸鉀及苦味酸等，單一固定液不能固定細胞中的所有成分;混合固定液可以互補不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方見有關(guān)技術(shù)書籍)。因此，應(yīng)根據(jù)所要顯示的內(nèi)容來選擇適宜的固定液。10%福爾馬林(4%甲醛)或10%磷酸緩沖福爾馬林是病理切片常規(guī)使用的固定液，不僅適用于常規(guī)H精-伊紅)染色，還可以用于組織學(xué)有關(guān)的其他技術(shù)的切片染色。固定液的用量通常為材料塊的20倍左右，固定時間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以從1小時至數(shù)天，通常為1小時至24小時。

固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，否則會影響后期的染色效果。該步驟稱作洗滌多數(shù)用流水沖洗;使用含有苦味酸的固定液固定的則需用酒精多次浸洗;使用酒精或酒精混合液固定的組織，則不必洗滌，可直接進行脫水。固定后或洗滌后的組織內(nèi)充滿水分，若不除去水分則無法進行以后的透明、浸蠟與包埋處理，原因在于透明劑多數(shù)是苯類，苯類和石蠟均不能與水相融合，水分不能脫盡，苯類無法浸入。酒精為常用脫水劑，它既能與水相混合，又能與透明劑相混。為了減少組織材料的急劇收縮，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進行，通常從30%或50%酒精開始，經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精(無水乙醇)，每次時間為1~數(shù)小時，如不能及時進行各級脫水，材料可以放在70%酒精中保存，因高濃度酒精易使組織收縮硬化，不宜處理過久。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陸環(huán)等也可做脫水劑。

純酒精不能與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶的媒浸液，替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在這類媒浸液中浸漬，出現(xiàn)透明狀態(tài)，此液即稱透明劑，透明劑浸漬過程稱透明。常用的透明劑有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各種透明劑均是石蠟的溶劑。通常組織先經(jīng)純酒精和透明劑各半的混合液浸漬1~2小時，再轉(zhuǎn)入純透明劑中浸漬。透明劑的浸漬時間則要根據(jù)組織材料塊大小及屬于囊腔抑或?qū)嵸|(zhì)器官而定。如果透明時間過短，則透明不徹底，石蠟難于浸入組織;透明時間過長，則組織硬化變脆，就不易切出完整切片，最長為數(shù)小時。

用石蠟取代透明劑，使石蠟浸入組織而起支持作用。通常先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1~2小時，再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬3小時左右，浸蠟應(yīng)在高于石蠟熔點3℃左右的溫箱中進行，以利石蠟浸入組織內(nèi)。浸蠟后的組織材料塊放在裝有蠟液的容器中(擺好在蠟中的位置)，待蠟液表層凝固即迅速放入冷水中冷卻，即做成含有組織塊的蠟塊。容器可用光亮且厚的紙折疊成紙盒或金屬包埋框盒。如果包埋的組織塊數(shù)量多，應(yīng)進行編號，以免差錯。石蠟熔化后應(yīng)在蠟箱內(nèi)過濾后使用，以免因含雜質(zhì)而影響切片質(zhì)量，且可能損傷切片刀。通常石蠟采用熔點為56~58℃或60~62℃兩種，可根據(jù)季節(jié)及操作環(huán)境溫度來選用。

包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺，以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于小木塊上，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊切面與切片刀刃平行，旋緊。切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質(zhì)量，可用熱水或冷水等方法適當改變蠟塊硬度。通常切片厚度為4~7微米，切出一片接一片的蠟帶，用毛筆輕托輕放在紙上。

用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上，以免在以后的脫蠟、水化及染色等步驟中二者滑脫開。粘附劑是蛋白甘油。首先在潔凈的載玻片上涂抹薄層蛋白甘油，再將一定長度蠟帶(連續(xù)切片)或用刀片斷開成單個蠟片于溫水(45℃左右)中展平后，撈至玻片上鋪正，或直接滴兩滴蒸餾水于載玻片上，再把蠟片放于水滴上，略加溫使蠟片鋪展，最后用濾紙吸除多余水分，將載玻片放入45℃溫箱中干燥，也可在37℃溫箱中干燥，但需適當延長時間。

干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進行染色。用二甲苯脫蠟，再逐級經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。如果染料配制于酒精中，則將切片移至與酒精近似濃度時，即可染色。

染色的目的是使細胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察。未經(jīng)染色的細胞組織其折光率相似，不易辨認。經(jīng)染色可顯示細胞內(nèi)不同的細胞器及內(nèi)含物以及不同類型的細胞組織。染色劑種類繁多，應(yīng)根據(jù)觀察要求及研究內(nèi)容采用不同的染色劑及染色方法，還要注意選用適宜的固 定劑才能取得滿意的結(jié)果。經(jīng)典的蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(曙紅，Eosin)染色法是組織學(xué)標本及病理切片標本的常規(guī)染色，簡稱HE染色。經(jīng)HE染色后，細胞核被蘇木精染成紫藍色，多數(shù)細胞質(zhì)及非細胞成分被伊紅染成粉紅色。由于蘇木精是帶陽離子的染料，染液呈堿性，核內(nèi)染色質(zhì)及胞質(zhì)內(nèi)核糖體等物質(zhì)對這種染料有親和性，稱嗜堿性;而帶陰離子的染料伊紅配制的染液呈酸性，對這種染料的親和性，稱嗜酸性。有時不同的組織結(jié)構(gòu)還需要用特殊的染料及染色方法加以顯示，稱特殊染色。有些細胞組織經(jīng)硝酸銀浸潤后，可使溶液中銀離子還原成金屬銀或銀粒附著在細胞組織上，呈棕黑色，這種性質(zhì)稱親銀性，而有些細胞組織本身不能使硝酸銀的銀離子還原成金屬銀，還需加還原劑才能將銀離子還原，稱嗜銀性。

染色后的切片尚不能在顯微鏡下觀察，需經(jīng)梯度酒精脫水，在95%及純酒精中的時間可適當加長以保證脫水徹底;如染液為酒精配制，則應(yīng)縮短在酒精中的時間，以免脫色。二甲苯透明后，迅速擦去材料周圍多余液體，滴加適量(1~2滴)中性樹膠，再將潔凈蓋玻片傾斜放下，以免出現(xiàn)氣泡，封片后即制成永久性玻片標本，在光鏡下可長期反復(fù)觀察。注意有些染料需特定廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品。根據(jù)各種染色方法、組織類別及切片厚度，掌握適宜的染色時間，才能達到較好的染色效果。

石蠟制片程序及環(huán)節(jié)繁多，需數(shù)日才能完成1個周期，但切片可長期保存，供教學(xué)、科研及病理診斷及復(fù)察，并可利用蠟塊作其他項目的回顧性研究。病理常規(guī)制片過程中已簡化了一些細的環(huán)節(jié)或縮短了部分處理時間以適應(yīng)臨床需要(可縮短至2天)。雖然冰凍切片大大快于石蠟切片，但所顯示的形態(tài)結(jié)構(gòu)卻不如后者，因此病理醫(yī)生最后還需要根據(jù)石蠟切片作出準確診斷。近些年來，在病理常規(guī)制片過程中采用了微波技術(shù)，從而大大縮短了制片過程，而且對形態(tài)結(jié)構(gòu)并沒有影響。微波是一種波長很短、頻率卻很高的高頻電磁波[波長為1米 ~1毫米，頻率為300兆赫(MHz)~300千兆赫(GHz)]。組織經(jīng)微波輻射后加速組織內(nèi)部分子的高速運動，以使液體的運輸加快，增加彌散、滲透和交換效率，從而加速組織的固定、脫水、透明、包埋和染色各個環(huán)節(jié)。例如常規(guī)福爾馬林固定需數(shù)小時~1天，而且能引起組織收縮及某些抗原成分不同程度的受到破壞，微波固定僅需1~2分鐘，且可減少抗原的丟失和損害。選擇適當?shù)臋n次(功率)、輻射時間和溫度是極為重要的。目前微波技術(shù)的應(yīng)用在國內(nèi)尚處于起步階段，許多技術(shù)應(yīng)用環(huán)節(jié)尚需進一步摸索。

石蠟切片不僅是經(jīng)典的方法，又是最基本的方法，它與其他新的技術(shù)方法相結(jié)合，使傳統(tǒng)的老技術(shù)擴大了應(yīng)用范圍，開辟了許多新領(lǐng)域，增加了許多新的研究、觀察內(nèi)容。隨新的儀器及新的研究技術(shù)的不斷問世及使用，使組織學(xué)的觀察研究從簡單的形態(tài)結(jié)構(gòu)深入到各種成分的定性觀察，又從定性轉(zhuǎn)向定量計測，使細胞組織的形態(tài)，功能及代謝三結(jié)合，從而達到定性可靠、定位準確及定量可測。