色氨酸生產(chǎn)方法

1、3-吲哚乙腈與氨基脲縮合后，氰加成、水解得到外消旋色氨酸。

2、以3-吲哚甲醛與苯胺縮合，然后與a-硝基乙酸脂縮合，經(jīng)氫化水解得到DL-色氨酸。

3、丙烯醛-苯肼法:丙烯醛與N-丙二酸基乙酸胺在乙醇鈉存在下縮合，然后與苯肼縮合、環(huán)化，經(jīng)水解脫羧得到外消旋產(chǎn)品(此方法是最常用、最具經(jīng)濟的生產(chǎn)方法)。

本品為白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末;無臭，味微苦。熔點281~282℃(右旋體)，289℃分解，左旋體。外消旋體微溶于水(0.4%，25℃)和乙醇，溶于甲酸、稀酸和稀堿，不溶于氯仿和乙醚。0.2%的水溶液pH為5.5~7.0。

三字母符號:Trp

單字母符號:W

EINECS號: 205-819-9

熔點:281~282℃

書頁號:2010年版二部-281

C11H12N2O2 204.23

本品為L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸。按干燥品計算，含C11H12N2O2不得少于99%。

本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜(光譜集156圖)一致。

酸度取本品0.5g，加水50ml溶解后，依法測定(附錄Ⅵ H)，pH值應(yīng)為5.4~6.4。

溶液的透光度取本品0.5g，加2mol/L鹽酸溶液20ml溶解后，照分光光度法(附錄ⅣA)，在430nm的波長處測定透光率，不得低于95.0%。

氯化物取本品0.25g，依法檢查(附錄Ⅷ A),與標準氯化鈉溶液5.0ml制成的對照液比較，不得更濃(0.02%)。

硫酸鹽取本品1.0g，依法檢查(附錄Ⅷ B)，與標準硫酸鉀溶液2.0ml制成的對照液比較，不得更濃(0.02%)。

銨鹽取本品0.10g，依法檢查(附錄Ⅷ K)，與標準氯化銨溶液2.0ml制成的對照液比較，不得更深(0.02%)。

其他氨基酸取本品0.30g，加1mol/L鹽酸溶液1ml，加水適量使溶解，并稀釋成20ml，作為供試品溶液;精密量取適量，加水稀釋成每1ml中含75μg的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅴ B)試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(3:1:1)為展開劑，展開后，晾干，噴以茚三酮的丙酮溶液(1→50)，在80℃干燥10分鐘，立即檢視，供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點的顏色與對照溶液的主斑點比較，不得更深(0.5%)。

干燥失重取本品，在105℃干燥3小時，減失重量不得過0.2%(附錄Ⅷ L)。

熾灼殘渣取本品1.0g，依法檢查(附錄Ⅷ N)，遺留殘渣不得過0.1%。

鐵鹽取本品1.0g，熾灼灰化后，殘渣加鹽酸2ml，置水浴上蒸干,再加稀鹽酸4ml,微熱溶解后，加水30ml與過硫酸銨50mg，依法檢查(附錄Ⅷ G)，與標準鐵溶液2.0ml制成的對照液比較，不得更深(0.002%)。

重金屬取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，依法檢查(附錄Ⅷ H第二法)，含重金屬不得過百萬分之十。

砷鹽取本品2.0g，加鹽酸5ml與水23ml溶解后，依法檢查(附錄Ⅷ J第一法)，應(yīng)符合規(guī)定(0.0001%)。

熱原取本品，加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的溶液，依法檢查(附錄Ⅺ D)，劑量按家兔體重每1kg注射10ml，應(yīng)符合規(guī)定。

取本品約0.25g，精密稱定，加無水甲酸3ml溶解后,加冰醋酸50ml,

照電位滴定法(附錄Ⅶ A)，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。

每1ml高氯酸滴定液 (0.1mol/L)相當于20.42mg的C11H12N2O2。

方法名稱: 色氨酸原料藥-色氨酸的測定-電位滴定法

應(yīng)用范圍: 本方法采用滴定法測定色氨酸原料藥中色氨酸的含量。

本方法適用于色氨酸原料藥。

方法原理: 供試品加無水甲酸溶解后，加冰醋酸，照電位滴定法，用高氯酸滴定液滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正，根據(jù)滴定液使用量，計算色氨酸的含量。

試劑: 1.無水甲酸

2.冰醋酸

3. 高氯酸滴定液(0.1mol/L)

4.結(jié)晶紫指示液

5. 基準鄰苯二甲酸氫鉀

儀器設(shè)備: 電位滴定儀

試樣制備: 1. 高氯酸滴定液(0.1mol/L)

配制:取無水冰醋酸(按含水量計算，每1g水加醋酐5.22mL)750mL，加入高氯酸(70~72%)8.5mL，搖勻，放冷，加無水冰醋酸適量使成1000mL，搖勻，放置24小時。若所測供試品易乙?；瑒t須用水分測定法測定本液的含水量，再用水和醋酐調(diào)節(jié)至本液的含水量為0.01%~0.2%。

標定:取在105℃干燥至恒重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約0.16g，精密稱定，加無水冰醋酸20mL使溶解，加結(jié)晶紫指示液1滴，用本液緩緩滴定至藍色，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據(jù)本液的消耗量與鄰苯二甲酸氫鉀的取用量，算出本液的濃度。

2.結(jié)晶紫指示液

取結(jié)晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解。

操作步驟: 精密稱取供試品約0.15g，加無水甲酸3mL溶解后，加冰醋酸50mL，照電位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于20.42mg的C11H12N2O2。

注:"精密稱取"系指稱取重量應(yīng)準確至所稱取重量的千分之一。"精密量取"系指量取體積的準確度應(yīng)符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

參考文獻: 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，中國醫(yī)藥科技出版社，2010年版，二部，p.281。

氨基酸類藥。

1989年9月，一位44歲的美國婦女出現(xiàn)了浮腫、臉紅、腹痛、粘膜潰瘍、肌肉痛及無力等癥狀。檢驗發(fā)現(xiàn)她的白細胞數(shù)達到了每毫升11900個，其中有42%是嗜酸性粒細胞。在正常情況下，白細胞含量在每毫升4500到10000之間，而嗜酸性粒細胞不應(yīng)該超過350。到了10月份，她的癥狀進一步惡化，白細胞達到了每毫升18200個，而其中45%是嗜酸性粒細胞。

她的醫(yī)生束手無策，去咨詢一位風(fēng)濕病專家。那位專家也沒有什么線索，倒是發(fā)現(xiàn)另外還有一個類似病例。到了10月中旬，又出現(xiàn)了第三個病例。這三個病人都是嗜酸性粒細胞急劇增加，共同癥狀有:肌痛、乏力、口腔潰瘍、腹痛、呼吸急促、皮膚疹等。

這三個病人都是色氨酸的使用者。色氨酸是一種人體必需的氨基酸，普通人每天會通過蛋白質(zhì)攝入幾克。而純品的色氨酸，在市場上作為一種幫助睡眠的膳食補充劑銷售。因為它在常規(guī)飲食中普遍存在，沒有人懷疑它的安全性。

這三位病人都在服用色氨酸，所以它是罪魁禍首嗎?還是說，僅僅是一種巧合?

醫(yī)生們不知道，科學(xué)家們也不知道。從科學(xué)邏輯的角度來說，不能從這三位病人都服用色氨酸做出任何結(jié)論。但是，事關(guān)人命，人們必須基于這一點極為有限的證據(jù)作出公共衛(wèi)生決策。11月7日，一家雜志報道了這些奇怪的病例。11日，美國FDA發(fā)布公告，反對色氨酸的使用。隨即，美國疾控中心把這些癥狀命名為"嗜酸性粒細胞增多-肌痛綜合征"，簡稱EMS，并開始在全國范圍內(nèi)展開調(diào)查。17日，F(xiàn)DA下令召回每日服用劑量在100毫克以上的色氨酸制品。到了第二年3月下旬，出現(xiàn)了一個每日劑量低于100毫克的病例。FDA接著把召回范圍擴大到了所有含色氨酸的制品，只有特別批準的用途例外。而疾控中心收到了1500多起病例報告，死亡38人，推測實際的受害人數(shù)還要遠遠高于此。

顯然，F(xiàn)DA禁止色氨酸并沒有充分的證據(jù)支持。如果這一決定是"正確"的，倒也不會有人抗議"程序不公"--在健康領(lǐng)域的公共決策上，從來是"寧可錯殺一千，不可放過一個"。但如果色氨酸是無辜的，那么拉了色氨酸做替罪羊絲毫不能保護公眾。禁止色氨酸，只是一個權(quán)宜之計，找出幕后黑手的工作刻不容緩。EMS的病因研究，一時間成了熱門。

很快有兩項"病例--對照"研究發(fā)表。研究收集了一些EMS"病例"，同時找了一些在其他方面跟病例情況相似、但沒有得EMS的"對照"。比較他們的生活方式，發(fā)現(xiàn)病人中多數(shù)服用色氨酸，而對照中則很少。于是，在EMS事件中，色氨酸脫不了干系。

不過，色氨酸畢竟是人體需要且從食物中大量攝取的氨基酸，要給它定罪這兩項調(diào)查研究也還是"證據(jù)不足"。更讓人關(guān)注的是，所有EMS病人服用的色氨酸都是由同一家公司生產(chǎn)的，當時共有六家公司生產(chǎn)這種產(chǎn)品。人們很容易地想到:不是色氨酸本身，而是其中的雜質(zhì)在作祟。

在EMS爆發(fā)之前，那家公司換了一個菌株來生產(chǎn)色氨酸。因為這個菌株經(jīng)過基因工程改造，所以直到現(xiàn)在還有"反轉(zhuǎn)基因人士"用它來"證明"轉(zhuǎn)基因的危害。其實，在此之前，那家公司采用的菌株也是經(jīng)過基因工程改造的。而跟這次菌株更新一起的更新的，還有后續(xù)分離純化的步驟。也就是說，拿這個例子來"顯示"轉(zhuǎn)基因技術(shù)的危害，完全是斷章取義。

于是，許多研究者比較導(dǎo)致EMS的那些色氨酸和其他"正常"色氨酸產(chǎn)品的異同。在現(xiàn)代分離和分析技術(shù)的"火眼金睛"之下，確實發(fā)現(xiàn)了致病的那些色氨酸中含有某些"正常"色氨酸產(chǎn)品中沒有的雜質(zhì)。在1990年的《科學(xué)》雜志上，還有一篇論文報道了這樣的發(fā)現(xiàn)。

要確認是那些雜質(zhì)在作祟，還需要證明那些雜質(zhì)本身能夠?qū)е翬MS癥狀。因為倫理原因，這顯然不能拿人來做實驗。后來，也出現(xiàn)了一些論文，宣稱用這些雜質(zhì)在動物身上重現(xiàn)了EMS的某些癥狀。

一切似乎水落石出，可以定案了。也確實有許多人接受了EMS的"雜質(zhì)致病說"。歐洲生物技術(shù)聯(lián)盟在2000年發(fā)表的一份公報中就持這種觀點。支持這一結(jié)論和決策的還有一個證據(jù)是:89年那一次EMS爆發(fā)之后，確實沒有再出現(xiàn)過EMS病人。在修正了色氨酸的生產(chǎn)流程之后，色氨酸也被解禁了。

但是也有科學(xué)家對這個結(jié)論不以為然。在90年代的一些文獻中，有學(xué)者指出:當初的那兩項"病例-對照"研究很不嚴謹，缺陷很多，并不能得出補充色氨酸導(dǎo)致EMS的結(jié)論。另一方面，關(guān)于雜質(zhì)的研究是"先定罪，再辦案"的思路，后來用雜質(zhì)使動物出現(xiàn)EMS的研究也有設(shè)計上的缺陷。到底EMS的病因是啥，依然是霧里看花。

另一些研究則發(fā)現(xiàn)，過多攝入色氨酸，會增加多種代謝產(chǎn)物，而這些代謝產(chǎn)物中有些種類會抑制組胺的分解，最終導(dǎo)致EMS的癥狀。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)，EMS的病人和非病人在身體內(nèi)因方面也有差異。

遮光，密封，在涼處保存。

色氨酸是植物體內(nèi)生長素生物合成重要的前體物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)與IAA相似，在高等植物中普遍存在?？梢酝ㄟ^ 色氨酸合成生長素，有兩條途徑:

(1)色氨酸首先氧化脫氨形成吲哚丙酮，再脫羧形成吲哚乙醛;吲哚乙醛在相應(yīng)酶的催化下最終氧化為吲哚乙酸。

(2)色氨酸先脫羧形成色胺，然后再由色胺氧化脫氨形成吲哚乙酸。

本品是重要的營養(yǎng)劑?？蓞⑴c動物體內(nèi)血漿蛋白質(zhì)的更新，并可促使核黃素發(fā)揮作用，還有助于煙酸及血紅素的合成，可顯著增加懷孕動物胎仔體內(nèi)抗體，對泌乳期的乳牛和母豬有促進泌乳作用。當畜禽缺乏色氨酸時，生長停滯，體重下降，脂肪積累降低，種公畜睪丸萎縮。在醫(yī)藥上用做癩皮病的防治劑。