厭氧培養(yǎng)培養(yǎng)工藝

厭氧培養(yǎng)--微生物厭氧培養(yǎng)

1.可利用厭氧產(chǎn)氣袋法進行厭氧培養(yǎng)。

規(guī)格2.5L的產(chǎn)氣袋只能將2.5L容積內(nèi)的氧氣完全吸收，轉(zhuǎn)化成二氧化碳，同理，3,5L的產(chǎn)氣袋能吸收3.5L容積的氧氣。微需要產(chǎn)氣袋和二氧化碳產(chǎn)氣袋亦是如此，為達到相應的氧氣濃度和二氧化碳濃度，不僅容積要固定，放置的培養(yǎng)物數(shù)量也基本要裝滿，在出廠前都根據(jù)計算設定好了的，所以，培養(yǎng)也需要在設定的條件下進行。

日本三菱的厭氧培養(yǎng)罐有兩種規(guī)格:2.5L(13.5*19.7*9.5cm,容納12只9cm標準培養(yǎng)皿)，配套使用1只2.5L規(guī)格的厭氧產(chǎn)氣袋;7.0L(21.3*28.0*11.2cm,容納42只9cm標準培養(yǎng)皿)，配套使用3只2.5L規(guī)格的厭氧產(chǎn)氣袋或者2只3.5L的厭氧產(chǎn)氣袋。兩種都是長方體，原廠的產(chǎn)氣袋培養(yǎng)后不會產(chǎn)生負壓，直接可以打開，所以不需要泄壓孔。

2.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管(有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內(nèi)在半小時內(nèi)造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達厭氧狀態(tài)，可以孵育。

3.厭氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今為止國際上公認的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內(nèi)進行操作，故名。箱側(cè)有一交換室，具有內(nèi)外二門，內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關(guān)上外門進行抽氣和換氣(H2，CO2，N2)達到厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開，將物品移入箱內(nèi)，關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài)，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi)，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養(yǎng)研究，大量培養(yǎng)基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)節(jié)。

? 由于目的不同而有不同的培養(yǎng)方法，可分為以下幾大類:

(1)與空氣隔絕或盡量少接觸空氣的培養(yǎng)法:在三角瓶瓶頸以下裝滿液體培養(yǎng)基，通過煮沸把溶解的空氣趕出后，立即冷卻進行細菌接種。由于發(fā)酵而產(chǎn)生H2和CO2時，就可進一步確認是厭氧細菌。另外，把瓊脂培養(yǎng)基加入普通試管約10厘米高度進行穿刺培養(yǎng)，或移植于液體培養(yǎng)基和固體斜面培養(yǎng)基上以后，再加一層液體石臘或礦物油，用這些方法可防止與空氣接觸。

(2)除掉空氣的方法:把微生物裝入耐壓容器中進行真空培養(yǎng)，或充滿二氧化碳、氫氣、氮氣、氬氣等。這些氣體可把事先混入的微量氧氣除掉。在氫存在時，可用置換后飛濺火花等方法來除掉殘存的氧氣

(3)去氧的方法:使用堿性鄰苯 三酚(pyrogallol) 、黃磷、金屬鉻和稀硫酸進行化學除氧，或使用好氧細菌及發(fā)芽的種子，使通過呼吸而消耗掉氧氣。

(4)在培養(yǎng)基中加入還原劑(如0.1%的巰基乙酸鈉鹽，0.01%的硫化鈉等)。以上各種方法進行適當組合就能進一步確認厭氧細菌。為了確定厭氧性，可在堿性條件下加入葡萄糖并加熱，與配制的還原型次甲藍(美藍)溶液一起加入，保持脫色狀態(tài)即可。