硅膠柱層析

1.稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量;如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。

2.攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢琛Ｈ绻疵搫┦鞘兔?乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌;如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。

如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。

3.裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚(氯仿)，裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚(氯仿)將其沖入柱中。

4.壓實(shí)。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進(jìn)行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時(shí)由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。

5.上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。

6.過柱和收集。柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強(qiáng)度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子:10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分;1-2g上樣量，50g硅膠(200-300目)，20-50ml收一餾分。

7.檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個(gè)數(shù)量級。

8.送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或?yàn)橐后w，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的"硅膠"峰。

注意事項(xiàng)

1.先根據(jù)TLC方法篩選好洗脫劑，使兩相鄰物質(zhì)Rf值之差最大化

2.將柱子必須裝平整、均勻

3.考慮有限柱填料的吸附量

4.可考慮用梯度法分開并洗脫

極性小的用乙酸乙酯:石油醚洗脫;極性較大的用甲醇:氯仿洗脫;極性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸洗脫;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

硅膠柱層析原理

硅膠層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而得到分離， 一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附，整個(gè)層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。

硅膠柱層析流動相

極性小的用乙酸乙酯:石油醚洗脫;極性較大的用甲醇:氯仿洗脫;極性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸洗脫;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

硅膠柱層析慣用方法

稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量;如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢琛Ｈ绻疵搫┦鞘兔?乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌;如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚(氯仿)，裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚(氯仿)將其沖入柱中。壓實(shí)。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進(jìn)行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時(shí)由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。過柱和收集。柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強(qiáng)度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子:10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分;1-2g上樣量，50g硅膠(200-300目)，20-50ml收一餾分。檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個(gè)數(shù)量級。送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或?yàn)橐后w，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的"硅膠"峰。