聚合酶鏈式反應簡稱PCR(Polymerase Chain Reaction) (又稱:多聚酶鏈式反應) PCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等反應組成一個周期,循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方。PCR又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。
中文名稱 | PCR擴增 | 外文名稱 | Polymerase Chain Reaction |
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全稱 | 聚合酶鏈式反應 | 簡介 | 體外酶促合成特異DNA片段的方法 |
熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),實時熒光定量PCR儀主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的,而普通的PCR儀是做定性分析和擴增基因片段,定量PCR儀可以做普通PC...
專利技術應用實現快速高效均衡擴增檢測由光開關陣列、自聚焦透鏡和尾纖準直器及變增益微光O/E裝置組成的MEMS有機整體,在以16位單片機為核心的電控裝置管理下,能在毫秒級時間內完成多個標本快速均衡掃描檢...
生物化學、醫(yī)用分析儀器專家。
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評分: 4.4
采用CTAB法對基物培養(yǎng)獲得的香蒲擬發(fā)網菌(Stemonitopsis typhina(Wiggers))進行總DNA提取,并用引物對其12S rDNA片段進行擴增,擴增產物序列長度為376 bp,探討了香蒲擬發(fā)網菌的分子系統(tǒng)學關系。
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評分: 4.6
為了研究PCR擴增的最適條件,以GRG受體第二外顯子基因為對象,觀察了影響PCR反應的因素.研究結果表明:最佳變性溫度為92℃與94℃;最適的退火溫度為58℃;最適的引物濃度為0.6,0.8μmol;以1.0U酶量結果最滿意,最適dNTP濃度為100~150μmol/L,最適的鎂離子濃度為2.0mmol/L;最佳循環(huán)次數為35個循環(huán);該文可為希望引入PCR作為診斷實驗的實驗室提供有用的信息.
RT- PCR首先經反轉錄酶的作用以RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛,可用于檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA,關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組 DNA的污染。
用于反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT 及基因特異性引物中的一種。對于短的不具有發(fā)卡結構的真核細胞mRNA,三種都可。
RT-PCR反應受多個因素影響,如硫酸鎂的濃度, 引物退火的溫度,擴增的循環(huán)數等。
◇建議選擇0.5-3.0 mM (相差0.5 mM)的硫酸鎂作初步實驗。
◇對于具有較高Tm的引物,增加退火和延伸時的溫度對反應有利。較高的溫度有利于減少非特異的引物結合,因而提高特異產物的得率。
◇大多數目標RNA經40輪PCR反應就能觀察到。但如果目標RNA太稀少,或者只有很少的起始材料,有必要增加擴增的次數到45-50次。
這兩種引物分別稱為限制性引物與非限制性引物;其最佳比例一般為1:50~1:100,關鍵是限制引物的絕對量。限制性引物太多太少,均不利于制備ss-DNA。也可用普通PCR制備靶DNA雙鏈DNA(ds-DNA),再以ds-DNA為模板,只用其中一種過量引物進行單引物PCR制備ss-DNA。
產生的ds-DNA與ss-DNA由于分子量不同可以在電泳中分開,而得到純ss-DNA。
不對稱PCR主要為測序制備ss-DNA,尤為用c-DNA經不對稱PCR進行DNA序列分析是研究真核DNA外顯子的好方法。