分光光度法基本原理

當一束強度為I0的單色光垂直照射某物質的溶液后,由于一部分光被體系吸收,因此透射光的強度降至I,則溶液的透光率T為:T=(I0-I)/I0

根據(jù)朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律:

A=abc

式中A為吸光度，b為溶液層厚度(cm)，c為溶液的濃度(g/dm^3)， a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù) 與溶液的本性、溫度以及波長等因素有關。溶液中其他組分(如溶劑等)對光的吸收可用空白液扣除。

由上式可知，當溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時，吸光度A與溶液的濃度成線性關系。在定量分析時，首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況(吸收光譜)，從中確定最大吸收波長 ，然后以此波長 的光為光源，測定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲線。在分析未知溶液時，根據(jù)測量的吸光度A，查工作曲線即可確定出相應的濃度。這便是分光光度法測量濃度的基本原理。

紫外分光光度計，可見分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。

在分光光度計中，將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時，便可得到與不同波長相對應的吸收強度。如以波長(λ)為橫坐標，吸收強度(A)為縱坐標，就可繪出該物質的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法，稱為分光光度法，也稱為吸收光譜法。用紫外光源測定無色物質的方法，稱為紫外分光光度法;用可見光光源測定有色物質的方法，稱為可見光光度法。它們與比色法一樣，都以Beer-Lambert定律為基礎。 上述的紫外光區(qū)與可見光區(qū)是常用的。但分光光度法的應用光區(qū)包括紫外光區(qū)，可見光區(qū)，紅外光區(qū)。波長范圍

(1)200~400nm的紫外光區(qū)

(2)400~760nm的可見光區(qū)， (3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。