植物組織培養(yǎng)方法

母液Ⅲ的是：將稱(chēng)好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450 mL蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙猓缓髮煞N溶液混合，并將pH調(diào)至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。

各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標(biāo)簽，注明母液號(hào)、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

MS培養(yǎng)基中還需要加入2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、6-芐基嘌呤（6BA）等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液（0.1 mg/mL）。其配制方法是：分別稱(chēng)取這3種物質(zhì)各10 mg，將2，4-D和NAA用少量（1 mL）無(wú)水乙醇預(yù)溶，將6BA用少量（1 mL）的物質(zhì)的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過(guò)程需要水浴加熱，最后分別定容至100 mL，即得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的母液。

配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液Ⅰ為50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，與各種母液一起放入燒杯中。

配制培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)注意：①在使用提前配制的母液時(shí)，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動(dòng)盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液，重新進(jìn)行配制；②用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤(rùn)洗2次；③量取母液時(shí)，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳希咳?種，劃掉1種，以免出錯(cuò)。

溶化瓊脂 用粗天平分別稱(chēng)取瓊脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750 mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1 000 mL，攪拌均勻。

調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙（5.4～7.0）測(cè)培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止（培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在5.8）。

2 BA為細(xì)胞分裂素 NAA 是萘乙酸，為生長(zhǎng)素的一種

3 適于百合根的激素暫時(shí)沒(méi)找到

以下是葉片和胚的激素：對(duì)麝香百合 (LiliumlongiflorumThunb)葉片進(jìn)行離體培養(yǎng) ,可成功獲得無(wú)菌苗。試驗(yàn)結(jié)果表明 :培養(yǎng)基MS BA 0 1mg/L NAA 1 0mg/L適于初代培養(yǎng) ,有助于根和芽的分化 ;MS BA 0 5mg/L NAA1 5mg/L適于增殖培養(yǎng) ,利于愈傷組織的產(chǎn)生 ,并促進(jìn)芽的分化 ;生根培養(yǎng)基為 1/ 2MS NAA 1 0mg/L 多效唑 10 0mg/L ;當(dāng)試管苗根長(zhǎng) 1cm時(shí)移栽易成活

在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH的 MS培養(yǎng)基上培養(yǎng) ,蔗糖含量為 6 %～ 8%時(shí) ,百合幼胚胚性生長(zhǎng)最好 ,培養(yǎng) 30 d后可以得到正常胚 .在含有 0 .1 m g/ L NAA,1 m g/ L BA的 MS培養(yǎng)基上可以形成淡綠色的愈傷組織 ,將這些愈傷組織轉(zhuǎn)移到 1 / 2 MS無(wú)激素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)可以形成大量的不定芽 ,不定芽生根移栽后 ,其成活率可達(dá)90 %以上2100433B

1 MS培養(yǎng)基的配制包括以下步驟。

培養(yǎng)基母液的配制和保存 MS培養(yǎng)基含有近30種營(yíng)養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對(duì)這幾十種成分進(jìn)行稱(chēng)量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱(chēng)量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時(shí)，取其總量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL），加水稀釋?zhuān)瞥膳囵B(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類(lèi)物質(zhì)的量列出，供配制時(shí)使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg/L

NH4NO3 33 000

KNO3 38 000

CaCl2·2H2O 8 800

MgSO4·7H2O 7 400

KH2PO4 3 400

微量元素(母液Ⅱ)

KI 166

H3BO3 1 240

MnSO4·4H2O 4 460

ZnSO4·7H2O 1 720

Na2MoO4·2H2O 50

CuSO4·5H2O 5

CoCl2·6H2O 5

鐵鹽(母液Ⅲ)

FeSO4·7H2O 5 560

Na2-EDTA·2H2O 7 460

有機(jī)成分(母液Ⅳ)

ⅣA

肌醇 20 000

ⅣB

煙酸 100

鹽酸吡哆醇(維生素B6) 100

鹽酸硫胺素(維生素B1) 100

甘氨酸 400

以上各種營(yíng)養(yǎng)成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液。

上述幾種母液都要單獨(dú)配成1 L的貯備液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱(chēng)量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1 L。